CRISPR/Cas9-engineered human T cells hold great promise in improving T cell effector functions for adoptive T cell therapies. To ensure safety during CRISPR/Cas9 editing optimized gRNAs, novel variants or prediction tools for indel outcomes have been developed. Still, several reports describe the occurrence of CRISPR-induced chromosomal aberrations, such as loss of large DNA fragments or even aneuploidy. So far, the measures to increase the safety of T cell products focused on the CRISPR/Cas9 system. However, T cell-intrinsic features, such as their massive expansion after TCR stimulation, have not been fully taken into consideration. This thesis describes the effects of activation and proliferation status on the editing outcome in primary human T cells. While non-activated cells have a lower risk for large deletions in combination with a reduced knock-out efficiency, activated and fast proliferating cells show a higher rate of large deletions. It is also shown that the addition of the small molecule Pifithrin-⍺ during CRISPR/Cas9 editing results in smaller, more defined deletions and a reduced risk for chromosomal translocations. This works in a p53-independent manner.     «

CRISPR/Cas9-engineered human T cells hold great promise in improving T cell effector functions for adoptive T cell therapies. To ensure safety during CRISPR/Cas9 editing optimized gRNAs, novel variants or prediction tools for indel outcomes have been developed. Still, several reports describe the occurrence of CRISPR-induced chromosomal aberrations, such as loss of large DNA fragments or even aneuploidy. So far, the measures to increase the safety of T cell products focused on the CRISPR/Cas9 sy...     »

Ein vielversprechender Ansatz für die Verbesserung adoptiver T Zelltherapien ist die Genmodifikation der T Zellen mittels CRISPR/Cas9. Um die Sicherheit des CRISPR/Cas9-Editings zu gewährleisten, wurden optimierte gRNAs, neue Cas-Varianten und Outcome- Prädiktionsalgorithmen entwickelt. Dennoch berichten mehrere Studien über das Auftreten von CRISPR-induzierten chromosomalen Aberrationen, wie den Verlust großer DNA-Fragmente oder sogar Aneuploidie. Bisher fokussierten sich die Maßnahmen zur Verbesserung der Sicherheit von T-Zell-Produkten auf CRISPR/Cas9 spezifische Merkmale. T-Zell-intrinsische Eigenschaften, wie ihre massive Expansion nach der TCR-Stimulation, sind jedoch noch nicht vollständig berücksichtigt worden. In dieser Arbeit werden die Auswirkungen des Aktivierungs- und Proliferationsstatus auf das Editing Outcome in primären menschlichen T-Zellen beschrieben. Während nicht aktivierte Zellen ein geringeres Risiko für große Deletionen, aber auch eine reduzierte Knockout-Effizienz aufweisen, zeigen aktivierte und schnell proliferierende Zellen eine höhere Rate an großen Deletionen. Zudem wird gezeigt, dass das Hinzufügen des Inhibitors Pifithrin-⍺ während des CRISPR/Cas9-Editings zu kleineren, präziser definierten Deletionen und einem verringerten Risiko für chromosomale Translokationen führt. Dies geschieht auf p53-unabhängige Weise.     «

Ein vielversprechender Ansatz für die Verbesserung adoptiver T Zelltherapien ist die Genmodifikation der T Zellen mittels CRISPR/Cas9. Um die Sicherheit des CRISPR/Cas9-Editings zu gewährleisten, wurden optimierte gRNAs, neue Cas-Varianten und Outcome- Prädiktionsalgorithmen entwickelt. Dennoch berichten mehrere Studien über das Auftreten von CRISPR-induzierten chromosomalen Aberrationen, wie den Verlust großer DNA-Fragmente oder sogar Aneuploidie. Bisher fokussierten sich die Maßnahmen zur Ver...     »