Die Bedeutung von proteolytischen Faktoren allgemein und des uPA/PAI Systems im Besonderen in Hinblick auf Tumorerkrankungen ist vielfach gezeigt worden. Durch ihr Zusammenspiel ermöglichen sie es Tumorzellen, sich über Basalmembranen hinwegzusetzen und sich im Körper auszubreiten. Besonders auch beim Mammakarzinom konnte dieser Zusammenhang gezeigt werden. Da der Urokinase Rezeptor uPAR (CD87) die proteolytische Aktivität der Urokinase auf die Oberfläche von Tumorzellen bindet, spielt er eine zentrale Rolle in diesem Prozess. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war es, quantitative real-time RT-PCR Assays zum Nachweis der uPAR mRNA Formen uPAR-del5 und uPAR-wt zu entwickeln. Der Vorteil der mRNA Analyse ist einerseits, dass sie sehr rasche Ergebnisse liefert und andererseits nur sehr wenig Gewebe benötigt wird. Es wurden stabile Assays entwickelt, die auf der LightCycler Technologie basieren. Bei beiden Assays konnte eine hohe Spezifität und Sensitivität bestätigt werden. Durch die Verwendung von Standards mit 101 bis 105 Molekülen konnten auch sehr geringe Mengen der uPAR mRNA Spleissvarianten nachgewiesen werden. Nach Etablierung der Assays wurde eine Reihe von Zelllinien sehr unterschiedlicher Herkunft untersucht. Es zeigte sich, dass die uPAR mRNA Werte je nach Herkunft und Aggressivität der Zellen stark variierten und sehr gut mit den uPAR Antigenwerten korreliert werden konnten. Die Abstufung der Expression der uPAR mRNA Formen war uPAR-wt > uPAR-del5 > uPAR-del4+5. In mehreren Kollektiven von Patientinnen mit primärem Mammakarzinom aus verschiedenen Kliniken wurde das Verhältnis der uPAR mRNA Expression zu klinischen Parametern untersucht. Auch hier gab es eine große Bandbreite der uPAR mRNA Expression, wobei die verschiedenen Varianten des Gens sehr stark miteinander korrelierten. Im Hinblick auf den Nodalstatus, das Grading des Tumors und beispielsweise auch des Menopausenstatus gab es keine statistisch signifikanten Unterschiede. Allerdings zeigte sich, dass in Östrogenrezeptornegativen (und damit aggressiveren) Tumoren die uPAR-del5 Expression signifikant höher war als in hormonsensitiven Proben.     «

Die Bedeutung von proteolytischen Faktoren allgemein und des uPA/PAI Systems im Besonderen in Hinblick auf Tumorerkrankungen ist vielfach gezeigt worden. Durch ihr Zusammenspiel ermöglichen sie es Tumorzellen, sich über Basalmembranen hinwegzusetzen und sich im Körper auszubreiten. Besonders auch beim Mammakarzinom konnte dieser Zusammenhang gezeigt werden. Da der Urokinase Rezeptor uPAR (CD87) die proteolytische Aktivität der Urokinase auf die Oberfläche von Tumorzellen bindet, spielt er eine z...     »

There have been many studies regarding the significance of proteolytic factors in common and the uPA/PAI system in particular regarding cancer diseases. By their interaction they enable tumor cells to destroy the extracellular matrix and to spread into distant organs. This has been especially shown for breast cancer. Binding the proteolytic activity of urokinase onto the cell surface uPAR (CD87) plays a central role in this process. The aim of this project was to establish quantitative real-time RT-PCR assays to measure the uPAR mRNA variants uPAR-del5 and uPAR-wt. The advantage of mRNA analysis is on the one hand that results can be quickly aqcuired, and on the other hand that only small amounts of tissue are necessary. We established stable assay based on LightCycler technology, both with a high specificity and sensitivity. By using standards from 101 to 105 molecules also very small amounts of uPAR mRNA splice variants could be measured. Having established the assays, cell lines of very different origin were examined. As we could see, uPAR mRNA values differed a lot according to the aggressiveness and origin of the cells and could be correlated well to uPAR antigen levels. The expression levels of the uPAR mRNA variants were uPAR-wt > uPAR-del5 > uPAR-del4+5. We compared uPAR mRNA expression and clinical parameters in collectives of patients with primary breast cancer from different hospitals. There was a great variation of uPAR mRNA expression, with a strong correlation of the different gene variants. Regarding nodal status, tumor grading and for example menopausal status there were no statistically significant differences. Surprisingly, estrogen receptor negative (and thereby more aggressive) tumors showed a significant higher expression of uPAR-del5 than hormone sensitive tissue samples.     «

There have been many studies regarding the significance of proteolytic factors in common and the uPA/PAI system in particular regarding cancer diseases. By their interaction they enable tumor cells to destroy the extracellular matrix and to spread into distant organs. This has been especially shown for breast cancer. Binding the proteolytic activity of urokinase onto the cell surface uPAR (CD87) plays a central role in this process. The aim of this project was to establish quantitative real-time...     »