Die Kinase CDK6 wurde in Form verschiedener Fusionsproteine mit Hilfe des Baculovirus-Expressionsvektorsystems in hoher Ausbeute exprimiert und anschließend aufgereinigt. Die Fusionsproteine konnten in großer Reinheit gewonnen werden und wiesen eine hohe Stabilität auf. Die Spaltung der GST-CDK6 mit Thrombin ergab CDK6 als homogenes Protein, das aber eine verringerte Stabilität besaß. Zur Herstellung selektiv mit ¹⁵N-Aminosäuren markierter Proteine in Insektenzellen (Sf9) wurden die Medien IML406 und IML455 entwickelt. Bei der selektiven Markierung von GST mit diesen Medien wurden zumeist bessere NMR-spektroskopische Ergebnisse erzielt als bei der Markierung in E. coli, da Kreuzmarkierungen in Sf9 eine wesentlich geringere Rolle spielen. Expressionsstudien zeigten, dass in Sf9 weitaus mehr Aminosäuren in hohem Maße selektiv markiert werden können als in E. coli. Die Herstellung von selektiv markieren Proteinen in Sf9 stellt somit eine Alternative zu in-vitro-Expressionssystemen dar.     «

Die Kinase CDK6 wurde in Form verschiedener Fusionsproteine mit Hilfe des Baculovirus-Expressionsvektorsystems in hoher Ausbeute exprimiert und anschließend aufgereinigt. Die Fusionsproteine konnten in großer Reinheit gewonnen werden und wiesen eine hohe Stabilität auf. Die Spaltung der GST-CDK6 mit Thrombin ergab CDK6 als homogenes Protein, das aber eine verringerte Stabilität besaß. Zur Herstellung selektiv mit ¹⁵N-Aminosäuren markierter Proteine in Insektenzellen (Sf9) wurden die Medien IML40...     »

The kinase CDK6 was expressed as different fusion proteins using the baculovirus expression vector system in high yields and afterwards purified. The fusion proteins were obtained in high purity and possessed a high stability. The cleavage of GST-CDK6 with thrombin resulted in homogenous CDK6 with reduced stability. For production of selectively with ¹⁵N-amino acids labelled proteins in insect cells (Sf9) the media IML406 and IML455 were developed. In the most cases selective labelling of GST with these media in Sf9 yielded in better NMR spectra compared to the results in E. coli. The reason is the limited possibility of cross-labelling in Sf9. This fact enables the labelling of a higher number of amino acids with high yields in Sf9 compared to E. coli. Selective labelling in Sf9 can be an alternative to in vitro translation.     «

The kinase CDK6 was expressed as different fusion proteins using the baculovirus expression vector system in high yields and afterwards purified. The fusion proteins were obtained in high purity and possessed a high stability. The cleavage of GST-CDK6 with thrombin resulted in homogenous CDK6 with reduced stability. For production of selectively with ¹⁵N-amino acids labelled proteins in insect cells (Sf9) the media IML406 and IML455 were developed. In the most cases selective labelling of GST wi...     »