Mehrere Studien haben gezeigt, dass das Zytokin Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) bei wiederholter Stimulation von Zellen Toleranz gegenüber seinen eigenen Wirkungen induzieren kann. Um die molekularen Grundlagen, auf denen dieses Phänomen beruht, näher zu untersuchen, wurden monozytäre THP-1- und HeLa-Zellen in einen Zustand der TNF-Toleranz versetzt, indem sie über 72 h mit einer niedrigen TNF-Dosis vorbehandelt wurden. Bei anschließender Restimulation mit einer höheren TNF-Dosis war sowohl die Interleukin-8 (IL-8)-Promotor-abhängige Transkription, die durch die Transkriptionsfaktoren NF-kappaB und C/EBPbeta reguliert wird, als auch die transkriptionelle Aktivität an einem 3kappaB-abhängigen Promotorkonstrukt signifikant vermindert verglichen mit nicht präinkubierten Zellen. In den toleranten Zellen war weder die Aktivierung von NF-kappaB noch die I-kappaB-Proteolyse nach TNF-Restimulation beeinträchtigt. Bemerkenswerterweise wurde unter diesen Bedingungen eine erhöhte DNA-Bindung von C/EBPbeta an sein IL-8-Promotor-spezifisches DNA-Motiv sowie eine vermehrte Komplexbildung des C/EBPbeta-Proteins mit p65-enthaltenden NF-kappaB-Komplexen beobachtet. Schließlich führte die Überexpression von C/EBPbeta, nicht aber von Oct-1, zu einer deutlichen Hemmung nicht nur der IL-8-Promotor-abhängigen, sondern auch der 3kappaB-vermittelten Transkription. Somit deuten diese Ergebnisse darauf hin, dass C/EBPbeta eine negativ regulatorische Rolle bei der Hemmung der Transkription NF-kappaB-abhängiger Gene in TNF-toleranten Zellen spielt. Da im 3kappaB-abhängigen Promotor aber kein C/EBPbeta-DNA-Bindungsmotiv vorhanden ist, ist der Effekt von C/EBPbeta offenbar unabhängig von einer direkten DNA-Bindung. Vielmehr scheint er durch die Assoziation mit p65 über die NF-kappaB-DNA-Bindungsstellen vermittelt zu werden. Dieser Mechanismus könnte bei entzündlichen Prozessen wie Sepsis, bei ischämischen und malignen Erkrankungen von Bedeutung sein.    «

Mehrere Studien haben gezeigt, dass das Zytokin Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) bei wiederholter Stimulation von Zellen Toleranz gegenüber seinen eigenen Wirkungen induzieren kann. Um die molekularen Grundlagen, auf denen dieses Phänomen beruht, näher zu untersuchen, wurden monozytäre THP-1- und HeLa-Zellen in einen Zustand der TNF-Toleranz versetzt, indem sie über 72 h mit einer niedrigen TNF-Dosis vorbehandelt wurden. Bei anschließender Restimulation mit einer höheren TNF-Dosis war sowohl die Inter...    »

There is evidence, that the cytokine tumor necrosis factor (TNF) is able to induce tolerance after repeated stimulation of cells. To investigate the molecular mechanisms mediating this phenomenon, TNF-tolerance was induced in monocytic THP-1- and HeLa-cells by pretreatment for 72 h with a low TNF dose. When restimulated with a higher TNF dose, the interleukin-8 (IL-8) promoter-dependent transcription, which is regulated by transcription factors NF-kappaB and C/EBPbeta, as well as the transcriptional activity of a 3kappaB-dependent promoter construct was significantly reduced compared to not pretreated cells. In tolerant cells neither activation of NF-kappaB nor I-kappaB proteolysis was affected after TNF restimulation. Remarkably, under these conditions an increased binding of C/EBPbeta to its IL-8-promoter-specific DNA motif as well as an eleveated association of C/EBPbeta protein with p65 containing NF-kappaB complexes was observed. Finally, overexpression of C/EBPbeta, but not of Oct-1, markedly prevented not only TNF-induced IL-8-promoter- but also 3kappaB-dependent transcription. Taken together, these results indicate, that C/EBPbeta plays a negative-regulatory role in downregulating NF-kappaB-dependent gene transcription in TNF tolerant cells. As there is no C/EBPbeta motif in the 3kappaB-dependent promoter, the effect of C/EBPbeta seems to be independent of direct DNA-binding, but could be mediated through NF-kappaB binding sites by the association of C/EBPbeta with p65. This mechanism may be of relevance in inflammatory processes such as sepsis, in ischemic and malignant diseases.    «

There is evidence, that the cytokine tumor necrosis factor (TNF) is able to induce tolerance after repeated stimulation of cells. To investigate the molecular mechanisms mediating this phenomenon, TNF-tolerance was induced in monocytic THP-1- and HeLa-cells by pretreatment for 72 h with a low TNF dose. When restimulated with a higher TNF dose, the interleukin-8 (IL-8) promoter-dependent transcription, which is regulated by transcription factors NF-kappaB and C/EBPbeta, as well as the transcripti...    »