Der Transkriptionsfaktor c-Myc aus der Familie der basischen Helix-Loop-Helix/Leuzin-Zipper (b-HLH-Zip) Proteine reguliert eine Vielzahl von Genen. In Tumoren ist die Expression von c-Myc häufig dereguliert. Da sämtliche bekannte biologische Funktionen von c-Myc dessen Bindung an seinen Aktivierungspartner Max erfordern, eröffnen niedermolekulare Inhibitoren der c-Myc/Max Dimerisierung neue Möglichkeiten zur Klärung der genauen Funktion von c-Myc, sowie möglicherweise neue Ansätze für die Tumortherapie. Im Rahmen dieser Arbeit wurden zwei niedermolekulare Inhibitoren der c-Myc/Max Dimerisierung und DNA-Bindung identifiziert, und ihre Aktivitäten und Spezifitäten in unabhängigen in vitro Assays sowie zellulären Assays nachgewiesen. Dazu wurde zunächst ein Fluoreszenzpolarisationsassay entwickelt, der die Identifizierung potentieller niedermolekularer Inhibitoren der Dimerisierung und DNA-Bindung von c Myc/Max in einem Hochdurchsatz-Screen erlaubte. Aus einer strukturell diversen chemischen Substanzbibliothek mit 17298 Mitgliedern wurde eine Verbindung, in der Arbeit als Mycro1 bezeichnet, identifiziert, welche die Dimerisierung und DNA-Bindung von c-Myc und Max im mikromolaren Konzentrationsbereich inhibierte. Eine weitere, strukturell verwandte Verbindung besaß vergleichbare Aktivität. Die Aktivitäten beiden Inhibitoren wurden in Gelshift-Assays und GST-Pulldown Experimenten verifiziert. Die in dieser Arbeit identifizierten Substanzen sind die ersten Inhibitoren der c-Myc/Max-Dimerisierung, die sowohl die Dimerisierung als auch die DNA-Bindung von c-Myc/Max mit akzeptabler Selektivität gegenüber strukturell ähnlichen Transkriptionsfaktoren aus der Familie der b-HLH-Zip oder der b-Zip Proteine in vitro inhibieren. In zellulären Assays inhibierten die Verbindungen selektiv die c-Myc-abhängige Proliferation, Gentranskription und onkogene Transformation im unteren mikromolaren Konzentrationsbereich. Diese Daten zeigen, dass die Aktivität dimerer Transkriptionsfaktoren, selbst bei Abwesenheit offensichtlicher Bindungstaschen, selektiv durch niedermolekulare, zellpermeable Verbindungen reguliert werden kann.     «

Der Transkriptionsfaktor c-Myc aus der Familie der basischen Helix-Loop-Helix/Leuzin-Zipper (b-HLH-Zip) Proteine reguliert eine Vielzahl von Genen. In Tumoren ist die Expression von c-Myc häufig dereguliert. Da sämtliche bekannte biologische Funktionen von c-Myc dessen Bindung an seinen Aktivierungspartner Max erfordern, eröffnen niedermolekulare Inhibitoren der c-Myc/Max Dimerisierung neue Möglichkeiten zur Klärung der genauen Funktion von c-Myc, sowie möglicherweise neue Ansätze für die Tumort...     »

The transcription factor c-Myc a member of the family of basic helix-loop-helix leucine zipper proteins (b-HLH-LZip), regulates a variety of genes. In tumors the expression of c-Myc is often deregulated. Since all known biological functions of c-Myc require its binding to its activation partner Max, small molecule inhibitors of c-Myc/Max dimerisation offer new possibilities for elucidating the correct function of c-Myc as well as new approaches for tumor therapy. In this project two small molecule inhibitors of c-Myc/Max dimerisation and DNA binding were identified and their activity and specificity was demonstrated in independent in vitro and cell-based assays. First a fluorescence polarization assay was developed that allowed for the identification of potential small molecule inhibitors of c-Myc/Max dimerisation and DNA binding in a high throughput screen. From a structurally diverse chemical library comprising 17298 members, one compound was identified that inhibited c-Myc/Max dimerisation and DNA binding in the low micromolar range. Another structurally related compound showed similar activity. The activities of both inhibitors were verified in gel-shift assays and GST-pulldown experiments. The compounds identified here are the first inhibitors of c-Myc that inhibit both dimerisation and DNA binding of c-Myc/Max in vitro with acceptable selectivity with regard to structurally related transcription factors of the family of b-HLH-Zip or b-Zip proteins. In cellular assays these compounds selectively inhibit c-Myc-dependent proliferation, gene transcription and oncogenic transformation in the low micromolar concentration range. These results demonstrate that the activity of dimeric transcription factors can selectively be regulated with cell-permeable small molecules, even in the absence of obvious binding pockets.     «

The transcription factor c-Myc a member of the family of basic helix-loop-helix leucine zipper proteins (b-HLH-LZip), regulates a variety of genes. In tumors the expression of c-Myc is often deregulated. Since all known biological functions of c-Myc require its binding to its activation partner Max, small molecule inhibitors of c-Myc/Max dimerisation offer new possibilities for elucidating the correct function of c-Myc as well as new approaches for tumor therapy. In this project two small molecu...     »