The [URE3] prion of Saccharomyces cerevisiae shares many features with mammalian prions and poly-glutamine related disorders and has become a model to study amyloid diseases. Several studies suggest that the N-terminal domain of Ure2p is essential for prion formation. In [URE3] cells, Ure2p is found predominantly in an aggregated state, while it is a soluble dimer in wild-type cells. In this thesis, the dimeric wild-type protein and an N-terminal domain mutant were purified and characterized in relation to structure and stability. Polymerization kinetics of wild-type protein and mutant were investigated under varying conditions e.g. salt concentration, salt type, temperature, pH and buffer, and the resulting fibrillar states were characterized. Moreover, the mechanism of fibril formation was studied by isolating soluble oligomeric species (nuclei) and characterizing them with respect to size and structure. The conversion of Ure2p into a structure with a higher content of beta-sheets was demonstrated for both fibrilization intermediates and mature fibrils. These results support the crucial role of the N-terminal domain for conformational conversion and fibril formation, while the structure of the C-terminal domain is very similar in dimeric and fibrillar Ure2p.     «

The [URE3] prion of Saccharomyces cerevisiae shares many features with mammalian prions and poly-glutamine related disorders and has become a model to study amyloid diseases. Several studies suggest that the N-terminal domain of Ure2p is essential for prion formation. In [URE3] cells, Ure2p is found predominantly in an aggregated state, while it is a soluble dimer in wild-type cells. In this thesis, the dimeric wild-type protein and an N-terminal domain mutant were purified and characterized in...     »

Das [URE3] Prion aus Saccharomyces cerevisiae besitzt viele Gemeinsamkeiten mit Säugerprionen und Polyglutamin-assoziierten Erkrankungen. Es dient daher als Modellsystem für die Untersuchung von Amyloidkrankheiten. Verschiedene Studien konnten zeigen, dass die N-terminale Domäne von Ure2p essentiell für die Prionenbildung ist. In [URE3]-Zellen liegt Ure2p als Aggregat vor, während es in Wildtyp-Zellen dimer ist. In dieser Arbeit wurden das Wildtyp-Protein sowie dessen N-terminale Domäne gereinigt und hinsichtlich Struktur und Stabilität charakterisiert. Die Polymerisationskinetiken von Wildtyp-Protein und Mutante wurden in Abhängigkeit von den Lösungsmittelbedingungen (Salztyp und -konzentration, pH-Wert, Temperatur, Puffer) untersucht, und die dabei gebildeten Fibrillen näher charakterisiert. Zudem gelang es, Aufschluß über den Mechanismus der Fibrillenbildung zu erhalten, indem lösliche oligomere Spezies (Nuklei) isoliert und hinsichtlich Größe und Struktur charakterisiert wurden. Die Konversion von Ure2p in eine Struktur mit erhöhtem beta-Faltblattanteil konnte sowohl für Fibrillisierungsintermediate als auch für reife Fibrillen gezeigt werden. Diese Ergebnisse untermauern die zentrale Rolle der N-terminalen Domäne bzgl. konformationeller Konversion und Fibrillenbildung, während die Struktur der C-terminalen Domäne in dimerem und fibrillärem Ure2p eine ähnliche Struktur einnimmt.     «

Das [URE3] Prion aus Saccharomyces cerevisiae besitzt viele Gemeinsamkeiten mit Säugerprionen und Polyglutamin-assoziierten Erkrankungen. Es dient daher als Modellsystem für die Untersuchung von Amyloidkrankheiten. Verschiedene Studien konnten zeigen, dass die N-terminale Domäne von Ure2p essentiell für die Prionenbildung ist. In [URE3]-Zellen liegt Ure2p als Aggregat vor, während es in Wildtyp-Zellen dimer ist. In dieser Arbeit wurden das Wildtyp-Protein sowie dessen N-terminale Domäne gereinig...     »