Die vorliegende Arbeit beschreibt die biochemische und strukturelle Charakterisierung von Schlüsselenzymen verschiedener essentieller Stoffwechselwege. Die Kristallstrukturen der Transketolase (TK) aus Zea mays und der 3,4-Dihydroxy-2-butanon 4-phosphat Synthase (DBPS) aus Candida albicans konnten durch molekularen Ersatz gelöst werden. Die Struktur der DBPS im Komplex mit Ribulose 5-phosphat zeigte eine bisher bei Ortholog-Strukturen nicht beobachtete Konformation des für die Katalyse essentiellen sauren Loops, welche offenbar auf die Abwesenheit zweiwertiger Kationen zurückzuführen ist. Die TK-Struktur im Komplex mit Thiaminpyrophosphat wurde zur Erstellung eines modellierten Enzym-Substrat-Komplexes herangezogen. Die GTP-Cyclohydrolase I aus Arabidopsis thaliana konnte als erstes pflanzliches Ortholog löslich in E. coli exprimiert werden. Daten der Gleichgewichtssedimentationsanalyse weisen im Gegensatz zu früheren Berichten auf das Vorliegen eines Homotetramers hin.     «

Die vorliegende Arbeit beschreibt die biochemische und strukturelle Charakterisierung von Schlüsselenzymen verschiedener essentieller Stoffwechselwege. Die Kristallstrukturen der Transketolase (TK) aus Zea mays und der 3,4-Dihydroxy-2-butanon 4-phosphat Synthase (DBPS) aus Candida albicans konnten durch molekularen Ersatz gelöst werden. Die Struktur der DBPS im Komplex mit Ribulose 5-phosphat zeigte eine bisher bei Ortholog-Strukturen nicht beobachtete Konformation des für die Katalyse essentiel...     »

This work describes the biochemical and structural characterization of key enzymes of different essential metabolic pathways. The crystal structures of transketolase (TK) of Zea mays and 3,4-dihydroxy-2-butanone 4-phosphate synthase (DBPS) of Candida albicans were solved using molecular replacement techniques. The structure of DBPS in complex with ribulose 5-phosphate uncovered a hitherto unknown conformation of the catalytically essential acidic loop. This conformation obviously occurs only in the absence of divalent cations. The crystal structure of TK in complex with thiamine pyrophosphate was used to build a model of the enzyme-substrate-complex. As the first ortholog of the plant kingdom, GTP-cyclohydrolase I of Arabidopsis thaliana was expressed solublely in a recombinant E. coli -system. Sedimentation equilibrium centrifugation of the purified enzyme indicated the existence of a homotetramer, in contrast to former reports suggesting a homodimer.     «

This work describes the biochemical and structural characterization of key enzymes of different essential metabolic pathways. The crystal structures of transketolase (TK) of Zea mays and 3,4-dihydroxy-2-butanone 4-phosphate synthase (DBPS) of Candida albicans were solved using molecular replacement techniques. The structure of DBPS in complex with ribulose 5-phosphate uncovered a hitherto unknown conformation of the catalytically essential acidic loop. This conformation obviously occurs only in...     »