Der Abbau zytosolischer Proteine ist ein ATP-abhängiger Prozeß. In Eukaryonten gibt es einen einzigen löslichen Komplex, das 26S Proteasom. In Prokaryonten dagegen gibt es eine ganze Reihe Proteasen. Eine davon ist HslVU. Es besteht eine interessante Verbindung zwischen HslVU und den 26S Proteasom. Die Proteasekomponente HslV hat ~20% Sequenzähnlichkeit und eine konservierte Faltung mit den betha-Untereinheiten des 20S Proteasoms gemeinsam. HslU gehört zur Familie der Hsp100 (Clp ATPasen) Proteine. Die E.coli Gene HslV und HslU wurden überexprimiert und aufgereinigt. Das Reinigungsprotokoll für HslU wurde optimiert. Folgende Kombinationen wurden miteinander kristallisiert: (1) HslV, HslU, AMP-PNP; (2) HslU, AMP-PNP; (3) HslU. Alle Kristalle führten zur Strukturlösung. Es wurde ein Assay zur Bestimmung von ATP-Bindung und ein SulA-Degradationsassay etabliert. Durch eine Mutagenesestudie an der ATP-Bindetasche von HslU wurde der Einfluß der positiv und negativ geladenen Reste auf die ATP-Hydrolyse/Bindung von HslU und der Proteolyseaktivitäten von HslVU untersucht. Mittels des SulA- Degradationsassays wurden weitere HslU-Mutanten mit HslV charakterisiert.     «

Der Abbau zytosolischer Proteine ist ein ATP-abhängiger Prozeß. In Eukaryonten gibt es einen einzigen löslichen Komplex, das 26S Proteasom. In Prokaryonten dagegen gibt es eine ganze Reihe Proteasen. Eine davon ist HslVU. Es besteht eine interessante Verbindung zwischen HslVU und den 26S Proteasom. Die Proteasekomponente HslV hat ~20% Sequenzähnlichkeit und eine konservierte Faltung mit den betha-Untereinheiten des 20S Proteasoms gemeinsam. HslU gehört zur Familie der Hsp100 (Clp ATPasen) Protei...     »

The degradation of cytoplasmatic proteins is an ATP-dependent process. Substrates are targeted to single soluble protease, the 26S proteasome, in eukaryotes and to a number of unrelated proteases is prokaryotes. A surprising link emerged with the discovery of the ATP-dependent protease HslVU. Its protease component HslV shares ~20% sequence similarity and a conserved fold with the 20S proteasome betha-subunits. HslU is a member of the Hsp100 (Clp) family of ATPases. The genes HslV and HslU were overexpressed, purified and crystallized in the combinations (1) HslU, (2) HslU +AMP-PNP, (3) HslV+HslU+AMP-PNP. The three structures were solved. The influence of the positvely and negatively charged residues near the gamma-phosphate of the nucleotide on nucleotide-binding, ATP-hydrolysis and proteolytic activity was studied by mutagenesis and biochemical experiments. Also the influence of two dozen HslU mutants on the SulA-MBP degradation by HslVU was determined     «

The degradation of cytoplasmatic proteins is an ATP-dependent process. Substrates are targeted to single soluble protease, the 26S proteasome, in eukaryotes and to a number of unrelated proteases is prokaryotes. A surprising link emerged with the discovery of the ATP-dependent protease HslVU. Its protease component HslV shares ~20% sequence similarity and a conserved fold with the 20S proteasome betha-subunits. HslU is a member of the Hsp100 (Clp) family of ATPases. The genes HslV and HslU were...     »