Das Gen der Ferredoxin-NADP+ Reduktase aus Capsicum annuum Yolo Wonder wurde sequenziert, kloniert und in E. coli exprimiert. Das Protein wurde bis zur Homogenität gereinigt, kristal-lisiert und die dreidimensionale Struktur bei einer Auflösung von 2,5 E aufgeklärt. Durch Molecular Modeling wurde ein Strukturmodell des Elektronentransferkomplexes zwischen der Ferredoxin-NADP+ Reduktase und den Substraten NADP+ sowie [2Fe-2S]-Ferredoxin I erzeugt. Die Analyse der Strukturmodelle ermöglichte generelle Rückschlüsse auf den Mechanismus des Elektronentransfers. Desweiteren wurden verschiedene Untereinheiten des 26S-Proteasoms aus Hefe und Mensch kloniert, exprimiert, gereinigt und biochemisch charakterisiert.     «

Das Gen der Ferredoxin-NADP+ Reduktase aus Capsicum annuum Yolo Wonder wurde sequenziert, kloniert und in E. coli exprimiert. Das Protein wurde bis zur Homogenität gereinigt, kristal-lisiert und die dreidimensionale Struktur bei einer Auflösung von 2,5 E aufgeklärt. Durch Molecular Modeling wurde ein Strukturmodell des Elektronentransferkomplexes zwischen der Ferredoxin-NADP+ Reduktase und den Substraten NADP+ sowie [2Fe-2S]-Ferredoxin I erzeugt. Die Analyse der Strukturmodelle ermöglichte gener...     »

cDNA of Capsicum annuum Yolo Wonder (paprika) has been prepared from total cellular RNA and the complete gene encoding paprika ferredoxin-NADP + reductase (pFNR) precursor was sequenced and cloned from this cDNA. Fusion to a T7 promoter allowed expression in E. coli. Both, native and recombinant pFNR was purified to homogeneity and crystallized. The crystal structure of pFNR has been solved by Patterson search techniques using the structure of spinach ferredoxin-NADP + reductase as search model. The structure was refined at 2.5 Å resolution to a crystallographic R-factor of 19.8 % (R free 26.5 %). The overall structure of pFNR is similar to other members of the ferredoxin-NADP + reductase family, the major differences concern a long loop (residues 167 to 177) which forms part of the FAD binding site and some of the variable loops in surface regions. The different orientation of the FAD binding loop leads to a tighter interaction between pFNR and the adenine moiety of FAD. The physiological redox partners [2Fe-2S]-ferredoxin I and NADP + were modeled into the native structure of pFNR. The complexes reveal a protein-protein interaction site that is consistent with existing biochemical data and imply possible orientations for the side-chain of tyrosine 362 which has to be displaced by the nicotinamide moiety of NADP + upon binding. A reasonable electron transfer pathway could be deduced from the modeled structures of the complexes.     «

cDNA of Capsicum annuum Yolo Wonder (paprika) has been prepared from total cellular RNA and the complete gene encoding paprika ferredoxin-NADP + reductase (pFNR) precursor was sequenced and cloned from this cDNA. Fusion to a T7 promoter allowed expression in E. coli. Both, native and recombinant pFNR was purified to homogeneity and crystallized. The crystal structure of pFNR has been solved by Patterson search techniques using the structure of spinach ferredoxin-NADP + reductase as search model....     »