Spatiotemporal control of the activity of CRISPR proteins is of general interest for basic research and therapeutics. We establish such control by modification of Cas12a guide RNAs. We primarily use activation by toehold-mediated strand displacement, which we use to switch Cas12a activity in vitro, in bacteria, and in mammalian cells. For the latter, we investigate the use of both Pol III and Pol II promoters for the transcription of circuit components.
Übersetzte Kurzfassung:
Räumliche und zeitliche Kontrolle der Aktivität von CRISPR Proteinen ist sowohl für Grundlagenforschung als auch für Medizin wünschenswert. Wir etablieren eine solche Kontrolle durch Entwicklung schaltbarer Cas12a Guide RNAs. Hierzu nutzen wir primär Aktivierung durch Toehold-Mediated Strand Displacement. Wir demonstrieren Kontrolle von Cas12a Aktivität in vitro, in Bakterien und in Säugetierzellen, wobei wir für Letzteres sowohl die Nutzung von Pol III als auch Pol II Promotoren untersuchen.
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