In der vorliegenden Arbeit wurde eine massenspektrometrische Methode zur Untersuchung enzymatischer Reaktionen in Echtzeit entwickelt. Mit Hilfe der angewandten ESI-MS-Technik war es möglich, sowohl den Substratabbau als auch die Produktbildung der von verschiedenen Glykosidasen katalysierten Hydrolysereaktionen simultan und ohne zusätzliche Markierung zu detektieren. Die ermittelten quantitativen Zeitkurven wurden zur in silico Analyse von Reaktionskinetiken herangezogen und lieferten somit zusätzliche Aussagen über Geschwindigkeitskonstanten und freie Bindungsenergien im aktiven Zentrum. Des Weiteren wurde die massenspektrometrische Methode zur Bestimmung von Affinitäten anhand der vorliegenden Komplexbildung und zur Durchführung von Inhibitionsstudien eingesetzt. Die Miniaturisierung dieser Methode ebenso wie die Übertragung auf komplexere Enzymsysteme zeigen, dass die Massenspektrometrie eine zukunftsweisende Detektionsmethode im Bereich der Enzymcharakterisierung darstellt.     «

In der vorliegenden Arbeit wurde eine massenspektrometrische Methode zur Untersuchung enzymatischer Reaktionen in Echtzeit entwickelt. Mit Hilfe der angewandten ESI-MS-Technik war es möglich, sowohl den Substratabbau als auch die Produktbildung der von verschiedenen Glykosidasen katalysierten Hydrolysereaktionen simultan und ohne zusätzliche Markierung zu detektieren. Die ermittelten quantitativen Zeitkurven wurden zur in silico Analyse von Reaktionskinetiken herangezogen und lieferten somit zus...     »

In the presented work a mass spectrometric method was developed for the real-time investigation of enzymatic reactions. With the applied ESI-MS technique substrate degradation and product formation of various glycosidase-catalyzed hydrolysis reactions could be monitored simultaneously and without labeling. The obtained quantitative time-courses were used for in silico analysis of reaction kinetics and provide additional information about rate constants and binding free energies in the active site. Furthermore, the determination of affinities on the basis of complex formation and the performance of inhibition studies were carried out with the mass spectrometric method. The miniaturization of this method as well as the transfer of more complex enzymatic reactions exhibits a promising detection method for the characterization of various enzymes.     «

In the presented work a mass spectrometric method was developed for the real-time investigation of enzymatic reactions. With the applied ESI-MS technique substrate degradation and product formation of various glycosidase-catalyzed hydrolysis reactions could be monitored simultaneously and without labeling. The obtained quantitative time-courses were used for in silico analysis of reaction kinetics and provide additional information about rate constants and binding free energies in the active sit...     »