Im Rahmen dieser Dissertation wurden zwei Aspekte zur Faltung und Assemblierung oligomerer Proteine bearbeitet. Zum einen wurden die Expression und die Sekretion des mono-klonalen Antikörpers MAK33 in der Hefe Saccharomyces cerevisiae analysiert. Die in das Kulturmedium abge-gebe-nen Antikörperketten (wenige µg/l) waren z.T. fragmentiert und formten keine aktiven Antikörper. Innerhalb der Zelle wurden die Ketten im ER und im Cytosol - in löslicher und unlöslicher Form -, sowie in den Vakuolen nachgewiesen. Auch die Koexpression von murinem BiP und Hefe-Hac1 führte zu keiner Erhöhung der Sekretionsrate der Antikörperketten. Insgesamt lassen diese Beobachtungen auf eine Überlastung des Hefesystems bzw. auf eine fehlerhafte Faltung der Antikörperketten innerhalb der Hefezelle schließen. Der zweite Teil dieser Arbeit beschäftigte sich mit Untersuchungen zur Stabilität und Struktur der Prolyl-4-Hydroxylase unter nativen und re-duzieren-den Bedingungen. Desweiteren wurde die Rekonstitution des Prolyl-4-Hydroxylase-Tetramers aus den isolierten Unter-einheiten analysiert.     «

Im Rahmen dieser Dissertation wurden zwei Aspekte zur Faltung und Assemblierung oligomerer Proteine bearbeitet. Zum einen wurden die Expression und die Sekretion des mono-klonalen Antikörpers MAK33 in der Hefe Saccharomyces cerevisiae analysiert. Die in das Kulturmedium abge-gebe-nen Antikörperketten (wenige µg/l) waren z.T. fragmentiert und formten keine aktiven Antikörper. Innerhalb der Zelle wurden die Ketten im ER und im Cytosol - in löslicher und unlöslicher Form -, sowie in den Vakuolen na...     »

Two aspects of folding and assembly of oligomeric proteins were investigated in this thesis. First, expression and secretion of the monoclonal antibody MAK33 in the yeast Saccharo-myces cerevisiae were analyzed. Small amounts of antibody chains (in the range of µg/l) were secreted into the culture medium. These chains were partially fragmented and did not assemble to active antibodies. Inside the cell, antibody chains were detected in the ER and in the cytosol - in soluble and insoluble form - and in vaculoes. Coexpression of murine BiP and yeast Hac1 did not result in an increase of secretion. These results suggest overloading of the cell system as well as incomplete and erroneous folding of the antibody chains in the cell. In the second part of the thesis, stability and structure of prolyl-4-hydroxylase were analyzed under native and reducing conditions. Additionally, reconstitution experiments of the tetramer of prolyl-4-hydroxylase from the isolated subunits were performed.     «

Two aspects of folding and assembly of oligomeric proteins were investigated in this thesis. First, expression and secretion of the monoclonal antibody MAK33 in the yeast Saccharo-myces cerevisiae were analyzed. Small amounts of antibody chains (in the range of µg/l) were secreted into the culture medium. These chains were partially fragmented and did not assemble to active antibodies. Inside the cell, antibody chains were detected in the ER and in the cytosol - in soluble and insoluble form - a...     »