Time-resolved small angle X-ray or neutron scattering is a method for the investigation of the kinetics of proteins in solution. A fast stopped-flow device is used for the triggering of the reaction by mixing the reactants and scattering data with a time-resolution of 300ms can be obtained at a third generation X-ray synchrotron such as the ESRF. Radiation damage of the proteins due to the high flux of photons was avoided by a continuous flow of mixed solution. The time-resolution is sufficient to follow the kinetics of ligand binding (e.g. ATP, ADP) and the association/dissociation reactions of large protein assemblies. A typical representative of a large protein complex are the multimerical proteins of the chaperonin family GroE (main chaperonin GroEL + co chaperonin GroES). These proteins assist the protein folding and show a remarkable interplay between cooperative and anti-cooperative ligand binding. Since the GroEL consists of 14 identical subunits an allosterical conformational switch was proposed to facilitate the cooperative ligand binding. Using the technique described above, structural data for the conformational changes of the chaperonins GroEL and GroES due to ligand binding as well as kinetic constants could be obtained. The allosterical conformational switch could be determined by the scattering data and the kinetics of the binding behaviour was analysed under different nucleotide conditions.     «

Time-resolved small angle X-ray or neutron scattering is a method for the investigation of the kinetics of proteins in solution. A fast stopped-flow device is used for the triggering of the reaction by mixing the reactants and scattering data with a time-resolution of 300ms can be obtained at a third generation X-ray synchrotron such as the ESRF. Radiation damage of the proteins due to the high flux of photons was avoided by a continuous flow of mixed solution. The time-resolution is sufficient...     »

Zeitaufgelöste Röntgen oder Neutronen Kleinwinkelstreuung ist eine Methode um die Kinetik von Proteinen in Lösung zu untersuchen. Durch schnelles Mischen der Reaktanten mit Hilfe einer Stopped-flow Apparatur kann eine Reaktion gestartet werden und dann die Kinetik der Reaktion an einem Synchrotron wie z.B. der ESRF in Grenoble untersucht werden. Die Zeitauflösung der Streudaten liegt hierbei bei 300ms. Der dazu benötigte hohe Fluss von hoch energetischen Photonen führt zu Proteinschäden, die aber durch einen kontinuierlichen Fluss von bereits gemischter Lösung verhindert werden können. Die Zeitauflösung von 300ms reicht aus um die Kinetik der Ligandbindung (z.B. ATP, ADP), sowie Assoziations- / Dissoziationsreaktionen von grossen Proteinkomplexen zu bestimmen. Typische Vertreter grosser, aus identischen Untereinheiten aufgebauter Proteinkomplexe sind die Chaperonine aus der Familie GroE; das Hauptchaperonin GroEL und das co-Chaperonin GroES. Diese Proteine unterstützen die Proteinfaltung und zeigen ein bemerkenswertes Zusammenspiel von kooperativen und anti-kooperativen Ligandbindungsverhalten. Da das GroEL aus 14 identischen Untereinheiten besteht, wurde eine allosterische Konformationsänderung vorausgesagt um eben diese kooperative Ligandbindung zu ermöglichen. Mit Hilfe von zeitaufgelöster Kleinwinkelstreuung konnten die Strukturänderungen der Chaperone GroEL und GroES während der Ligandbindung bestimmt werden. Der allosterische Übergang wurde als Proteinkonformation zwischen dem ungebunden und dem ligierten Zustand aus den Streudaten identifiziert. Desweiteren wurden die kinetischen Konstanten des Bindungsvorgangs unter verschiedenen Nukleotidebedingungen analysiert.     «

Zeitaufgelöste Röntgen oder Neutronen Kleinwinkelstreuung ist eine Methode um die Kinetik von Proteinen in Lösung zu untersuchen. Durch schnelles Mischen der Reaktanten mit Hilfe einer Stopped-flow Apparatur kann eine Reaktion gestartet werden und dann die Kinetik der Reaktion an einem Synchrotron wie z.B. der ESRF in Grenoble untersucht werden. Die Zeitauflösung der Streudaten liegt hierbei bei 300ms. Der dazu benötigte hohe Fluss von hoch energetischen Photonen führt zu Proteinschäden, die abe...     »