Die Evolution der relativen Quantifizierung

Die Reverse Transkription (RT) mit nachfolgender Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis einer spezifischen mRNA ist zu einem Routinewerkzeug in jedem molekularbiologischen Labor geworden. Eine Weiterentwicklung der RT-PCR ist die quantitative RT-PCR (qRT-PCR), die eine exakte Quantifizierung ermöglicht. Bei der qRT-PCR findet die Detektion bereits während der PCR-Amplifikation statt. Basierend auf fluoreszenzmarkierten Sonden oder sich anlagernden Fluorophoren kann die Vervielfältigung der Zielsequenz in Echtzeit verfolgt werden. In jedem Reaktionszyklus nimmt die Menge an fluoreszierenden PCR-Produkten und damit auch die Intensität der induzierten Fluoreszenzemission zu. Da die Zunahme der Fluoreszenz und die Menge an neusynthetisierten PCR-Produkten über einen weiten Bereich proportional zueinander sind, kann aus den gewonnenen Fluoreszenzdaten die eingesetzte Ausgangsmenge der cDNA, respektive RNA, bestimmt werden. Die vergleichende Expressionsanalytik ist in vielen molekularbiologischen Disziplinen, der universitären und industriellen Forschung, der Routinediagnostik sowie in der „Funktionellen Genomforschung“ von großem Nutzen.     «

Die Reverse Transkription (RT) mit nachfolgender Polymerase-Kettenreaktion (PCR) zum Nachweis einer spezifischen mRNA ist zu einem Routinewerkzeug in jedem molekularbiologischen Labor geworden. Eine Weiterentwicklung der RT-PCR ist die quantitative RT-PCR (qRT-PCR), die eine exakte Quantifizierung ermöglicht. Bei der qRT-PCR findet die Detektion bereits während der PCR-Amplifikation statt. Basierend auf fluoreszenzmarkierten Sonden oder sich anlagernden Fluorophoren kann die Vervielfältigung der...     »