Die Bindungseigenschaften eines vom Bilin-Bindungsprotein (BBP) abgeleiteten Anticalins His1DC* gegenüber dem His6-tag wurden mittels Affinitätsmaturierung verbessert. Bei der selektierten Variante mit der höchsten Affinität wurden alle Disulfidbrücken entfernt, ohne daß die Proteinfaltung beeinträchtigt wurde. Die Bindung dieser Variante an das His6-tag wurde anhand von His6-Fusionsproteinen charakterisiert und die Dissoziationskonstante für das freie Peptid zu 1,9 µM bestimmt. Zudem wurde ein Fusionsprotein des Anticalins mit der TEM 1 beta-Lactamase in E. coli produziert und seine enzymatische sowie Bindungs-Aktivität nachgewiesen. In einem Western Blot-Experiment wurde ein neues beta-Lactamase Substrat, welches zu einem gefärbten Präzipitat führt, in Verbindung mit diesem Fusionsprotein erfolgreich eingesetzt.      «

Die Bindungseigenschaften eines vom Bilin-Bindungsprotein (BBP) abgeleiteten Anticalins His1DC* gegenüber dem His6-tag wurden mittels Affinitätsmaturierung verbessert. Bei der selektierten Variante mit der höchsten Affinität wurden alle Disulfidbrücken entfernt, ohne daß die Proteinfaltung beeinträchtigt wurde. Die Bindung dieser Variante an das His6-tag wurde anhand von His6-Fusionsproteinen charakterisiert und die Dissoziationskonstante für das freie Peptid zu 1,9 µM bestimmt. Zudem wurde ein...     »

The binding properties of the anticalin His1DC* derived from the bilin binding protein (BBP) towards His6-tag were improved by affinity maturation. All disulphide bridges of the selected variant with the highest affinity were removed, whereby the protein fold was not impaired. The binding of this variant to His6-tag was characterised on the basis of His6-fusion proteins and the dissociation constant of 1.9 µM for the free peptide was determined. Furthermore, a fusion protein of the anticalin with the TEM 1 beta-lactamase was produced in E. coli and its enzymatic as well as binding activity was demonstrated. In a western blot experiment a new beta-lactamase substrate which leads to a coloured precipitate was successfully used in connection with the above mentioned fusion protein.      «

The binding properties of the anticalin His1DC* derived from the bilin binding protein (BBP) towards His6-tag were improved by affinity maturation. All disulphide bridges of the selected variant with the highest affinity were removed, whereby the protein fold was not impaired. The binding of this variant to His6-tag was characterised on the basis of His6-fusion proteins and the dissociation constant of 1.9 µM for the free peptide was determined. Furthermore, a fusion protein of the anticalin wit...     »