During its ATPase cycle, the AAA+ enzyme p97 transitions between four distinct protein and nucleotide states: apo, ATP-, ADP·Pi- and ADP-bound. So far, the ADP·Pi state has not been characterised as an authentic post-hydrolysis state of a AAA+ protein. We investigate this rate-determining step using solution- and solid-state NMR methods in combination with biophysical and –chemical techniques. Moreover, we test several nucleotide analogues for biological relevance and practical usefulness.
Übersetzte Kurzfassung:
Während des ATPase-Zyklus durchläuft das AAA+-Enzym p97 vier Protein- und Nukleotidzustände: apo, ATP-, ADP·Pi- und ADP-gebunden. Bislang wurde der ADP·Pi-Zustand noch nicht als authentischer Post-Hydrolyse-Zustand eines AAA+-Proteins charakterisiert. Wir untersuchen diesen geschwindigkeitsbestimmenden Schritt mittels Lösungs- und Festkörper-NMR in Kombination mit biophysikalischen und –chemischen Methoden. Zudem testen wir mehrere Nukleotid-Analoga auf biologische Relevanz und praktische Nützlichkeit.
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Während des ATPase-Zyklus durchläuft das AAA+-Enzym p97 vier Protein- und Nukleotidzustände: apo, ATP-, ADP·Pi- und ADP-gebunden. Bislang wurde der ADP·Pi-Zustand noch nicht als authentischer Post-Hydrolyse-Zustand eines AAA+-Proteins charakterisiert. Wir untersuchen diesen geschwindigkeitsbestimmenden Schritt mittels Lösungs- und Festkörper-NMR in Kombination mit biophysikalischen und –chemischen Methoden. Zudem testen wir mehrere Nukleotid-Analoga auf biologische Relevanz und praktische Nützli...
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