We developed a short-term feeder cell-free single CD8+ T cell expansion protocol that allows validation of pMHC multimer reactivity as well as structural TCR avidity measurement before TCR identification. In this way, we identified 28 TCRs which were all transgenically re-expressed. Additionally, we developed a novel double-tagged pMHC monomer which allows versatile probe conjugation to generate distinct pMHC reagents from a single precursor. This new pMHC reagents could be combined with the di-peptide exchange technique for rapid peptide exchange.
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We developed a short-term feeder cell-free single CD8+ T cell expansion protocol that allows validation of pMHC multimer reactivity as well as structural TCR avidity measurement before TCR identification. In this way, we identified 28 TCRs which were all transgenically re-expressed. Additionally, we developed a novel double-tagged pMHC monomer which allows versatile probe conjugation to generate distinct pMHC reagents from a single precursor. This new pMHC reagents could be combined with the di-...
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Übersetzte Kurzfassung:
Wir entwickelten ein Protokol zur schnellen Feeder-Zell-freien CD8-T-Zell -Expansion ausgehend von Einzelzellen. Dies erlaubte die Validierung der pMHC Reaktivität sowie die Messung struktureller TZR Avidität bevor der eigentlichen TZR Identifizierung. Dies ermöglichte die Identifizierung von 28 TZRs. Zusätzlich entwickelten wir neuartige doppel-markierte pMHC Monomere die eine flexible Konjugation funktioneller Gruppen ausgehend von einem gemeinsamen Vorläufermolekül gestattet. Die Reagenzien konnten erfolgreich mit der Dipeptid-Austausch-Technologie kombiniert werden.
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Wir entwickelten ein Protokol zur schnellen Feeder-Zell-freien CD8-T-Zell -Expansion ausgehend von Einzelzellen. Dies erlaubte die Validierung der pMHC Reaktivität sowie die Messung struktureller TZR Avidität bevor der eigentlichen TZR Identifizierung. Dies ermöglichte die Identifizierung von 28 TZRs. Zusätzlich entwickelten wir neuartige doppel-markierte pMHC Monomere die eine flexible Konjugation funktioneller Gruppen ausgehend von einem gemeinsamen Vorläufermolekül gestattet. Die Reagenzien k...
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