Das Cyclase-assoziierte-Protein (CAP) und seine Homologen sind G-Actin-sequestrierende Proteine. Die strukturelle Charakterisierung des D. discoideum CAP-Proteins erfolgte im Rahmen dieser Arbeit mittels magnetischer Kernresonanzspektroskopie. Dabei lag der Schwerpunkt in der Bestimmung der dreidimensionalen Struktur der stabilen N-terminalen Teildomäne des CAP-Proteins mit Hilfe von Distanzgeometrie- und molekulardynamischen Algorithmen. Die ermittelte Struktur stellt ein Bündel von sechs alpha-Helices dar, die antiparallel zueinander gerichtet sind. Dies dient als erste Annährung zur Aufklärung der strukturellen Bindungseigenschaften zwischen dem CAP-Protein und die Adenylyl-Cyclase. Des Weiteren wurde das D. discoideum Actin-bindende Protein 1 (DAip1) auch hier untersucht. Das DAip1 gehört zur Familie der „WD-repeat-Proteine“. Es ist ein F-Actin-bindendes Protein, das gemeinsam mit Cofilin den Turnover von Actin reguliert. Das DAip1 wurde in den Zellen von D. discoideum überexprimiert und aus dem Zell-Lysat gereinigt, so dass das reine Protein für die Kristallzüchtung erhältlich war. Die Erzeugung von DAip1-Einkristallen liefert den Ausgangspunkt zur Charakterisierung von DAip1 mittels Röntgenstrukturanalyse. Damit ergibt sich die Möglichkeit strukturelle Informationen sowohl über die Bindungsaffinität zu Cofilin als auch über die Interaktionen mit Actin zu gewinnen.     «

Das Cyclase-assoziierte-Protein (CAP) und seine Homologen sind G-Actin-sequestrierende Proteine. Die strukturelle Charakterisierung des D. discoideum CAP-Proteins erfolgte im Rahmen dieser Arbeit mittels magnetischer Kernresonanzspektroskopie. Dabei lag der Schwerpunkt in der Bestimmung der dreidimensionalen Struktur der stabilen N-terminalen Teildomäne des CAP-Proteins mit Hilfe von Distanzgeometrie- und molekulardynamischen Algorithmen. Die ermittelte Struktur stellt ein Bündel von sechs alpha...     »

The Dictyostelium discoideum cyclase associated protein (CAP) and its homologues of the higher and lower eukaryotic organisms are G-actin sequestering proteins. Our structural characterization of D. discoideum CAP was carried out using NMR spectroscopical methods, with the final aim to determine the three-dimensional structure of the amino-terminal core domain of CAP. The CAP-N structure consists of a bundle of six anti-parallels alpha-helices. A model of the full length of CAP was also proposed as a first approach to describe the binding properties between CAP and adenylyl cyclase. A second actin binding protein studied here was the D. discoideum actin binding protein 1 (DAip1), which belongs to the family of the „WD-repeat proteins“. It is an F-actin binding protein that interacts with cofilin in the cell cortex and regulates the actin turnover. DAip1 has been overexpressed in the cells of D. discoideum and was purified using ion exchange chromatography methods. An analytical gel filtration was used to obtain pure DAip1 samples that could be used for crystallization. The crystallization of DAip1 is the starting point of characterization of DAip1 using the X-ray crystallography method and should provide structural information about the binding activity of DAip1 to cofilin and actin.     «

The Dictyostelium discoideum cyclase associated protein (CAP) and its homologues of the higher and lower eukaryotic organisms are G-actin sequestering proteins. Our structural characterization of D. discoideum CAP was carried out using NMR spectroscopical methods, with the final aim to determine the three-dimensional structure of the amino-terminal core domain of CAP. The CAP-N structure consists of a bundle of six anti-parallels alpha-helices. A model of the full length of CAP was also proposed...     »