Zurzeit stehen mehrere Technologien zur Verfügung, Markergene aus transgenen Pflanzen zu entfernen. Aber keine wurde bisher erfolgreich in bayerischen Kartoffeln angewandt. Im Rahmen dieser Arbeit sollte eine neuartige Methode zur Herstellung Markergen-freier, transgener Kartoffelpflanzen entwickelt werden. Die Entfernung der Markergene erfolgte über ein bestimmtes sequenzspezifisches Rekombinationssystem - das γδ Resolvase/res System. Die γδ Resolvase katalysiert intramolekulare Deletionsreaktionen. Unerwünschte Inversionen – oder Reintegrationsereignisse, die Integrität und Stabilität des Pflanzengenoms unkontrollierbar beeinflussen könnten, werden von γδ Resolvase nicht katalysiert. Durch sequenzspezifische Rekombination werden die problematischen Markergen-Sequenzen vollständig entfernt und die übertragenen DNA-Sequenzen ausschließlich auf funktionell notwendige Elemente beschränkt. Zunächst wurden Expressionskonstrukte für Kartoffel erstellt, wobei γδ Resolvase-Sequenzen mit optimierter Kodonzusammensetzung unter der Kontrolle eines 35S - Promotors stehen. Im Folgenden wurden verschiedene Zielplasmide erzeugt, die 114 bp und 28 bp lange res-flankierten DNA-Sequenzen zwischen einem Promotor und gus-Reportergen tragen. Das System wurde in einem weiter entwickelten transienten Testsystem auf Basis von Kartoffelprotoplasten untersucht und dessen Funktionsfähigkeit gezeigt. γδ Resolvase und γδ Resolvase E102YE124Q führten zur genauen Rekombination der Testsubstrate. Dabei waren bereits 28 bp res-Sequenzen ausreichend. Auf Basis dieser Ergebnisse wurden T-DNA Plasmide konstruiert mit asGBSS-Sequenzen und einem nptII-Markergen, das von 28 bp res Motiven umgeben ist. Die transgenen Markergen-haltigen Kartoffelpflanzen wurden hergestellt. γδ Resolvase und γδ Resolvase E102YE124Q wurden in die Kartoffelzellen übertragen und führten zur Entfernung des nptII-Markers.      «

Zurzeit stehen mehrere Technologien zur Verfügung, Markergene aus transgenen Pflanzen zu entfernen. Aber keine wurde bisher erfolgreich in bayerischen Kartoffeln angewandt. Im Rahmen dieser Arbeit sollte eine neuartige Methode zur Herstellung Markergen-freier, transgener Kartoffelpflanzen entwickelt werden. Die Entfernung der Markergene erfolgte über ein bestimmtes sequenzspezifisches Rekombinationssystem - das γδ Resolvase/res System. Die γδ Resolvase katalysiert intramolekulare Deletionsreakti...     »

Meanwhile several technologies to remove marker genes from transgenic plants are available, but none succeeded in Bavarian potato cultivars. In this context a new method should be developed for the production of marker gene free, transgenic potato plants. The removal of the marker gene was accomplished by a sequence-specific recombination system - γδ resolvase/res catalyzing intramolecular deletions. Unwanted inversion reactions - or reintegrations by γδ resolvase, which might affect stability and integrity of the plant genome uncontrollably, are not processed. By sequence-specific recombination problematic marker gene sequences were completely detached. Transferred DNA sequences were limited to functionally necessary elements. Expression constructs for potato were prepared, whereby γδ resolvase sequences with optimized codon usage is under the control of a 35S - promoter. On the other hand different target plasmids were produced carrying 114 bp and 28 bp res flanked DNA sequences between a promoter and a gus reporter. The system was examined in a transient test system on basis of potato protoplasts and its operability was shown. γδ resolvase and γδ resolvase E102YE124Q lead to the exact recombination of test substrates. Already 28 bp res sequences were sufficient. On basis of this results T-DNA plasmids were designed with anti-sense GBSS sequences and a nptII marker surrounded by 28 bp res. Respective transgenic, nptII containing potato plants were produced. The latter use of γδ resolvase and γδ resolvase E102YE124Q led to the removal of nptII.      «

Meanwhile several technologies to remove marker genes from transgenic plants are available, but none succeeded in Bavarian potato cultivars. In this context a new method should be developed for the production of marker gene free, transgenic potato plants. The removal of the marker gene was accomplished by a sequence-specific recombination system - γδ resolvase/res catalyzing intramolecular deletions. Unwanted inversion reactions - or reintegrations by γδ resolvase, which might affect stability a...     »