The study focused on the induction of a T helper cell response against the tumor-associated antigen HER2/neu being commonly overexpressed in breast and ovarian tumors. For this purpose, the extracellular domain of the receptor tyrosine kinase was produced in CHO cells and purified in a two-step FPLC column procedure. The protein antigen was loaded on monocyte-derived dendritic cells to generate highly potent antigen presenting cells for the stimulation of autologous naive CD4+ T lymphocytes in an in vitro priming system. IFN-γ secreting cells were detected as soon as 2 weeks after initiation of DC-T cell microcultures. Unequivocal HER2/neu specificity, however, could only be demonstrated in one T cell line. Due to its CD4/CD8 double positive phenotype, there was strong evidence for clonal selection of a potentially autoreactive T cell, that escaped negative thymic selection. After isolation of the descendant T cell clone F2.5 the potential of these HER2/neu-reactive cells to differentiate to either CD4 or CD8 single positive T cells was demonstrated and found to be dependent on stimulation and growth conditions.     «

The study focused on the induction of a T helper cell response against the tumor-associated antigen HER2/neu being commonly overexpressed in breast and ovarian tumors. For this purpose, the extracellular domain of the receptor tyrosine kinase was produced in CHO cells and purified in a two-step FPLC column procedure. The protein antigen was loaded on monocyte-derived dendritic cells to generate highly potent antigen presenting cells for the stimulation of autologous naive CD4+ T lymphocytes in a...     »

Ziel der Arbeit war der Aufbau einer Methode zur Induktion einer T-Helferzellantwort gegen das tumorassoziierte Antigen HER2/neu. Hierzu wurde die extrazelluläre Domäne dieses vor allem beim Mammakarzinom überexprimierten Rezeptors in CHO-Zellen gentechnisch produziert und chromatographisch aufgereinigt. Mit dem Protein wurden Monozyten-abgeleitete dendritische Zellen beladen und diese zur Vakzinierung autologer CD4+ T-Zellen eingesetzt. Durch Expansion in Mikrokulturen wurden IFN-γ produzierende T-Helferzellen schon nach 2 Wochen identifiziert. Eine HER2/neu-Spezifität bestätigte sich jedoch nur bei T-Zellen einer Kultur. Wegen ihres CD4/CD8 doppelt-positiven Phänotyps wurde gefolgert, dass es sich um Nachkommen einer unreifen T-Zelle handelt, die der negativen Selektion im Thymus entging. Mit Hilfe des abgeleiteten T-Zellklons F2.5 wurde das Potential der Zellen aufgezeigt, sich abhängig von den Stimulationsbedingungen in CD4 oder CD8 einfach-positive T-Zellen zu differenzieren.     «

Ziel der Arbeit war der Aufbau einer Methode zur Induktion einer T-Helferzellantwort gegen das tumorassoziierte Antigen HER2/neu. Hierzu wurde die extrazelluläre Domäne dieses vor allem beim Mammakarzinom überexprimierten Rezeptors in CHO-Zellen gentechnisch produziert und chromatographisch aufgereinigt. Mit dem Protein wurden Monozyten-abgeleitete dendritische Zellen beladen und diese zur Vakzinierung autologer CD4+ T-Zellen eingesetzt. Durch Expansion in Mikrokulturen wurden IFN-γ produzierend...     »