This thesis develops a system to study human Hsp90's conformational rearrangements. Site-specific labeling of the protein using Sortase A-mediated ligation was performed to observe nucleotide-dependent conformational dynamics. The thesis also compares Hsp90 to Hsp82 regarding their closed state formation, revealing differences in activity and kinetics. Additionally, two residues in key elements of the conformational cycle were discovered that affect Hsp90's dynamics and enzymatic activity.
Übersetzte Kurzfassung:
Im Zuge dieser Arbeit wurde ein System zur Untersuchung der Konformationsänderungen von menschlichem Hsp90 entwickelt. Eine selektive Fluoreszenzmarkierung von Hsp90 wurde via Sortase A Ligation erreicht, um nukleotidabhängige Konformationsänderungen zu untersuchen. Zusätzlich wurde Hsp90 mit Hsp82 verglichen um Unterschiede hinsichtlich ihrer Aktivität und Kinetik zu erforschen. Zwei konservierte Aminosäurerest konnten identifiziert werden, die die Dynamik und Aktivität von Hsp90 beeinflussen.