Die phänotypische Modulation glatter Gefäßmuskelzellen (VSMCs) spielt in der Pathogenese der Atherosklerose eine Schlüsselrolle. Bringt man native glatte Muskelzellen in Kultur, so findet eine phänotypische Modulation zu proliferierenden synthetischen "atherogenen" glatten Muskelzellen statt. Ein Ziel dieser Arbeit war es, Proteine zu identifizieren, die während der phänotypischen Modulation von glatten Gefäßmuskelzellen reguliert werden. Hierzu wurde das Proteinprofil nativer Mausaorten mit dem kultivierter primärer VSMC verglichen. Mittels zweidimensionaler (2D) Gelelektrophorese und Massenspektrometrie wurden 12 regulierte Proteine identifiziert. Herunterreguliert wurden mitochondriale Stoffwechselenzyme . Hochreguliert wurden "actin cytoplasmic 1/2" als Bestandteil des Zytoskeletts, Annexin A3 und Dimethylarginin Dimethylaminohydrolase 1, das mit vaskulären Erkrankungen assoziiert ist. Des Weiteren erfolgte eine Hochregulation von Proteinen, für die eine Rolle im Zellzyklus und bei der Proliferation beschrieben wurde. Hierzu zählen das "chloride intracellular channel protein I", das ubiquitin conjugating enzyme E2N", "ran specific GTPase activating protein und Stathmin. Stathmin wurde noch nicht in Zusammenhang mit VSMCs erwähnt. Mittels Western Blot und semiquantitativer RT-PCR wurde die Expressionsänderung auf Protein-und RNA Ebene bestätigt. Die Hochregulation von Stathmin weist darauf hin, dass Stathmin ein Markerprotein synthetischer VSMCs darstellen und eine Rolle bei der Pathogenese vaskulärer Krankheiten spielen könnte. So konnte mit Hilfe des entdeckungsorientierten Proteomansatzes Proteine identifziert werden, die möglicherweise an der phänotypischen Modulation von VSMCs und damit an der Entstehung der Atherosklerose beteiligt sein könnten. Ein weiteres Ziel war die Identifizierung der Substratproteine der cGMP abhängigen Proteinkinase I (cGKI) in VSMCs. Hierzu wurde die Phosphoproteomanalyse gewählt. Durch Vergleich des Phosphoproteoms von Wildtyp und cGKI-defizienten VSMCs wurden drei potentielle Substratproteine detektiert. Die Identifizierung mittels Massenspektrometrie steht derzeit noch aus.     «

Die phänotypische Modulation glatter Gefäßmuskelzellen (VSMCs) spielt in der Pathogenese der Atherosklerose eine Schlüsselrolle. Bringt man native glatte Muskelzellen in Kultur, so findet eine phänotypische Modulation zu proliferierenden synthetischen "atherogenen" glatten Muskelzellen statt. Ein Ziel dieser Arbeit war es, Proteine zu identifizieren, die während der phänotypischen Modulation von glatten Gefäßmuskelzellen reguliert werden. Hierzu wurde das Proteinprofil nativer Mausaorten mit dem...     »

Phenotypic modulation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays a key role in the pathogenesis of atherosclerosis. Cell culture of of vascular smooth muscle cells leads to phenotypic modulation towards proliferating synthetic VSMCs. The aim of this project was to identify proteins that are regulated during phenotypic modulation. Therefore the protein profile of native mouse aorta was compared with cultivated primary VSMCs. Using 2D gel electrophoresis and mass spectrometry 12 regulated proteins were identified. We found a downregulation of mitochondrial metabolic enzymes We found an upregulatio of"actin cytoplasmic ½, annexin A3 and dimethylarginine dimethylaminohydrolase 1, that ist associated with vascular diseases. Furthermore we found an upregulation of proteins that play a key role in cell cycle. These are “chloride intracellular channel protein”, “ubiquitin conjugating enzyme E2N”, “ran specific GTPase activating enzyme” and stathmin. Stathmin has not been associated yet with vascular smooth muscle cells. Using western blot and rt-pcr we confirmed the change in expression on protein and RNA level. The upregulation of stathmin indicates that stathmin could be a marker protein of synthetic VSMCs and could play a role in the pathogenesis of atherosclerosis. Using proteome analysis we could identify proteins that could play a role in phenotypic modulation and in the pathogenesis of atherosclerosis. Another aim of project was to identify the substrate proteins of cgmp dependent protein kinase I (cGKI). We used phosphoproteome analysis. We compared the phosphoproteome of wildtype and cGKI deficient VSMCs. We detected three candidates. Mass spectrometry is being made     «

Phenotypic modulation of vascular smooth muscle cells (VSMCs) plays a key role in the pathogenesis of atherosclerosis. Cell culture of of vascular smooth muscle cells leads to phenotypic modulation towards proliferating synthetic VSMCs. The aim of this project was to identify proteins that are regulated during phenotypic modulation. Therefore the protein profile of native mouse aorta was compared with cultivated primary VSMCs. Using 2D gel electrophoresis and mass spectrometry 12 regulated prote...     »