Durch eine geeignete Verteilung der Gene des M13 Phagen auf Helferplasmid und Phagemid gelang die skalierbare Herstellung von ssDNA mit nutzerdefinierter Sequenz in einem Zulaufprozess mit E. coli im Rührkesselreaktor, ohne dabei selbstreplizierende Phagen einsetzen zu müssen. Dadurch konnte die maximale ssDNA-Konzentration um den Faktor 40 gegenüber Literaturdaten gesteigert werden. Dies konnte auch im m3 Maßstab mit einer Gesamtausbeute von 92 % bei der Produktisolierung gezeigt werden.
Übersetzte Kurzfassung:
Appropriate distribution of the M13 phage genes between helper plasmid and phagemid enabled the scalable production of single-stranded DNA (ssDNA) with user-defined sequence in a fed-batch process with E. coli in a stirred-tank bioreactor without making use of self-replicating phages. This process increased the maximum ssDNA concentration by a factor of 40 compared to literature data, which was also demonstrated on a m3 scale with an overall ssDNA isolation yield of 92%.