A large-diameter DNA nanopore was characterized through the droplet interface bilayer setup and the translocation of dsDNA, RNA, and rNTPs through the pore was proven. Further, it was probed, whether rationally designed guide RNA structures can mediate CRISPR/Cas9-Cas12 assisted DNA looping. The structures were examined with atomic force microscopy. For the purpose, a dCas12a protein was mutated into an RNase inactive version of dCas12a.
Translated abstract:
Eine DNS-Nanopore mit großem Durchmesser wurde anhand eines DIB Aufbaus charakterisiert. Die Translokation von DNS, RNS und rNTPs durch die Pore wurde nachgewiesen. Des Weiteren wurden rational entworfene RNS-Strukturen, die CRISPR/Cas9-Cas12-unterstütztes DNS-Looping ermöglichen sollen, mittels Rasterkraftspektroskopie untersucht. Zu diesem Zweck wurde ein dCas12a-Protein zu einer RNase-inaktiven Version des dCas12a-Proteins mutiert.