The aim of this work was to expand and further improve currently available tools for protein engineering with noncanonical amino acids. In this context, genetic code engineering and expansion were successfully conjoined, inter alia by incorporating 4-benzoylphenylalanine (Bpa) in combination with norleucine (Nle) into Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus lipase (TTL). The generated mutated TTL congener retained heat activation independency introduced by Nle while additionally endowing the possibility for crosslinking with Bpa. To facilitate such work in the future, a new vector system for co-expression of aminoacyl-tRNA synthetase:tRNA pairs was developed. Additionally, it was surveyed whether the reassignment of rare codons can be exploited for site-specific incorporation of noncanonical amino acids into target proteins.     «

The aim of this work was to expand and further improve currently available tools for protein engineering with noncanonical amino acids. In this context, genetic code engineering and expansion were successfully conjoined, inter alia by incorporating 4-benzoylphenylalanine (Bpa) in combination with norleucine (Nle) into Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus lipase (TTL). The generated mutated TTL congener retained heat activation independency introduced by Nle while additionally endowing the po...     »

Das Ziel dieser Arbeit war die Erweiterung und Verbesserung der derzeit verfügbaren Methoden zum protein engineering mit nichtkanonischen Aminosäuren. In diesem Zusammenhang wurden die Methoden genetic code engineering und genetic code expansion erfolgreich kombiniert. Unter anderem wurde der gleichzeitige Einbau von 4-Benzoylphenylalanine (Bpa) und Norleucine (Nle) in die Lipase von Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus (TTL) erreicht. Das entstandene mutierte TTL Kongener zeigte weiterhin die durch Nle Einbau hervorgerufene Unabhängigkeit von Hitzeaktivierung, während das zusätzliche Bpa die Möglichkeit zur Quervernetzung ins Protein einbrachte. Um derartige Arbeiten zukünftig zu erleichtern, wurde außerdem ein neues Plasmidsystem für die Koexpression von Aminoacyl-tRNA Synthetase:tRNA Paaren entwickelt. Zusätzlich wurde ausgelotet, inwieweit sich eine Umwidmung von selten benutzten Basentripletts zum Einbau nichtkanonischer Aminosäuren in Zielproteine eignet.     «

Das Ziel dieser Arbeit war die Erweiterung und Verbesserung der derzeit verfügbaren Methoden zum protein engineering mit nichtkanonischen Aminosäuren. In diesem Zusammenhang wurden die Methoden genetic code engineering und genetic code expansion erfolgreich kombiniert. Unter anderem wurde der gleichzeitige Einbau von 4-Benzoylphenylalanine (Bpa) und Norleucine (Nle) in die Lipase von Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus (TTL) erreicht. Das entstandene mutierte TTL Kongener zeigte weiterhin d...     »