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- Original title:
- In vivo Tandem Labeling of Proteins: Combining Chemical Orthogonality with Intrinsic Blue Fluorescence
- Translated title:
- In vivo Tandemmarkierung von Proteinen: Kombination chemischer Orthogonalität mit intrinsischer Fluoreszenz
- Author:
- Lepthien, Sandra
- Year:
- 2008
- Document type:
- Dissertation
- Faculty/School:
- Fakultät für Chemie
- Advisor:
- Budisa, Nediljko (Priv.-Doz. Dr.)
- Referee:
- Budisa, Nediljko (Priv.-Doz. Dr.); Kiefhaber, Thomas (Prof. Dr.); Buchner, Johannes (Prof. Dr.)
- Language:
- en
- Subject group:
- BIO Biowissenschaften; CHE Chemie
- Keywords:
- fluorescence, azatryptophan, tandem labeling, click chemistry, expanded genetic code, protein engineering, expression, posttranslational modifications
- Translated keywords:
- Fluoreszenz, Azatryptophan, Tandem-Einbau, Click-Chemie, erweiterter genetischer Code, Protein-Engineering, Expression, posttranslationale Modifizierung
- Abstract:
- This thesis reports the in vivo expression of intrinsically fluorescent proteins without posttranslational modifications, and furthermore their additional functionalization with a reactive handle for individual chemical conjugation reactions. The blue-fluorescent 4-azatryptophan and the methionine analog homopropargylglycine, which enables copper-catalyzed Huisgen cycloadditions, were simultaneously incorporated into one protein. This represents the first successful tandem incorporation of two non-canonical amino acids using polyauxotrophic Escherichia coli cells and opens up new dimensions for rational protein design using an expanded genetic code.
- Translated abstract:
- Die vorliegende Dissertation präsentiert die in vivo Expression von intrinsisch-fluoreszierenden Proteinen ohne weitere posttranslationale Modifizierungen sowie die zusätzliche Funktionalisierung dieser Proteine mit einer reaktiven Gruppe für individuelle chemische Konjugationsreaktionen. Das blau-fluoreszierende 4-Azatryptophan und das Methioninanalogon Homopropargylglycin, das den Einsatz der Kupfer-katalysierten Huisgen-Cycloaddition ermöglicht, wurden simultan in ein Protein eingebaut. Dieser erste erfolgreiche Tandemeinbau zweier nicht-kanonischer Aminosäuren mit Hilfe von polyauxotrophen Escherichia coli-Zellen eröffnet eine neue Dimension des rationellen Proteindesigns mit einem erweiterten genetischen Code.
- WWW:
- https://mediatum.ub.tum.de/?id=673683
- Date of submission:
- 24.09.2008
- Oral examination:
- 16.12.2008
- Pages:
- 124
- Urn (citeable URL):
- https://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn:nbn:de:bvb:91-diss-20080919-673683-1-0
- Last change:
- 09.01.2009
BibTeX