Die chronische Pankreatitis (CP) ist eine Erkrankung der Bauchspeicheldrüse, bei der es durch anhaltende oder rezidivierende Entzündungsprozesse zu einem fibrotischen Umbau des Drüsenparenchyms kommt. Bisher konnten verschiedene Gene identifiziert werden, deren Mutationen unterschiedlich stark mit der Entstehung einer CP assoziiert sind. Da diese Mutationen vor allem Enzyme aus dem Proteasen-/ Antiproteasen-System betreffen, wurden in dieser Arbeit drei Gene untersucht, die für pankreatische Lipasen kodieren: Carboxylester-Lipase (CEL), Pankreatische Phospholipase A2 (PLA2G1B) und Pankreatische Lipase (PNLIP) Für CEL wurden 510 Patienten mit idiopathischer oder hereditärer CP auf das Vorliegen eines Hybrid-Allels (CEL-HYB) getestet, das aus einer Fusion von CEL und seinem benachbarten Pseudogen CELP entstanden ist. Das Patientenkollektiv wurde mit 2362 gesunden Kontrollpersonen verglichen. Des Weiteren wurden 352 Patienten mit alkohol-induzierter CP untersucht. Als Screening-Methode auf CEL-HYB wurde eine Schmelzkurvenanalyse durchgeführt. Alle Positiv-Proben wurden zur Verifizierung noch einer DNA-Sequenzierung nach Sanger unterzogen. CEL-HYB konnte sowohl in der Gruppe der Patienten mit idiopathischer und hereditärer CP als auch in der Gruppe der Patienten mit alkohol-induzierter CP signifikant gehäuft nachgewiesen werden. Alle positiv getesteten Individuen waren heterozygote Träger der Mutation. Um zu untersuchen, ob weitere seltene Varianten in der kodierenden Region ebenfalls zu einer chronischen Pankreatitis disponieren, analysierten wir 364 Patienten und 238 Kontrollen mittels Sanger-Sequenzierung auf die Exone 1 bis 10, fanden aber keine Varianten, die bei chronischer Pankreatitis überrepräsentiert waren. Für PLA2G1B wurde der gesamte kodierende Bereich einschließlich der Exon-Intron-Grenzen mittels PCR und DNA-Sequenzierung nach Sanger nach Varianten abgesucht. Die Analyse erfolgte bei 151 Patienten mit nicht-alkoholischer CP und 186 gesunden Kontrollen. Es fanden sich zwei verschiedene Varianten im Exon 3, die aber zu keinem Aminosäureaustausch führten: c.222T>C (p.Y74=) und c.294G>A (p.S98=). Es zeigte sich keine signifikante Häufung bei Patienten mit CP im Vergleich zu den Kontrollen (c.222TC: CP 0,9 % vs. Kontrollen 1,0 %; c.294GA: CP 3,0 % vs. Kontrollen 2,8 %; c.294AA: CP 0,2 % vs. Kontrollen 0,1 %). Somit spielen PLA2G1B-Varianten in der Pathogenese der CP wahrscheinlich keine Rolle. Auch für PNLIP wurden alle 13 Exone einschließlich der Exon-Intron-Grenzen mittels PCR und DNA-Sequenzierung nach Sanger analysiert. Hierfür wurden 429 Patientin mit idiopathischer und hereditärer CP sowie 600 gesunde Kontrollpersonen untersucht. Für PNLIP konnten heterozygote nicht-synonyme Mutationen bei 8/429 (1,9%) Patienten und bei 2/600 (0,3 %) Kontrollen identifiziert werden. Die am häufigsten gefundene Variante war p.F300L, die sich bei 4 Patienten, aber bei keiner Kontrolle fand. Sowohl die Variante p.F300L als auch alle Varianten insgesamt fanden sich signifikant häufiger in der Gruppe der Patienten im Vergleich zur Gruppe der Kontrollen. Somit konnte erstmals gezeigt werden, dass auch Lipasen eine Rolle bei der Entstehung einer CP spielen. Im Gegensatz zu den bereits bekannten Risikogenen aus dem Proteasen-/Antiproteasen-System beruht der Pathomechanismus nicht auf einer vorzeitigen Aktivierung pankreatischer Verdauungsenzyme. Vielmehr könnte eine Akkumulation defekter Proteine zu Zellschäden führen und Autophagozytoseprozesse auslösen. Die beiden in dieser Arbeit identifizierten Risikogene stellen damit in mehrerlei Hinsicht eine außergewöhnliche und neuartige Erkenntnis in der Pankreatitisforschung dar.     «

Die chronische Pankreatitis (CP) ist eine Erkrankung der Bauchspeicheldrüse, bei der es durch anhaltende oder rezidivierende Entzündungsprozesse zu einem fibrotischen Umbau des Drüsenparenchyms kommt. Bisher konnten verschiedene Gene identifiziert werden, deren Mutationen unterschiedlich stark mit der Entstehung einer CP assoziiert sind. Da diese Mutationen vor allem Enzyme aus dem Proteasen-/ Antiproteasen-System betreffen, wurden in dieser Arbeit drei Gene untersucht, die für pankreatische Lip...     »

Chronic pancreatitis (CP) is a continuing or relapsing inflammatory disease of the pancreas leading to irreversible morphological changes of the gland. Until now various gene mutations have been identified that are associated with CP. Since most of these mutations affect enzymes of the protease-antiprotease system, here we analysed three genes encoding pancreatic lipases: Carboxyl ester lipase (CEL), pancreatic phospholipase A2 (PLA2G1B) and pancreatic lipase (PNLIP) For CEL we screened 510 patients with idiopathic or hereditary CP for a hybrid allele (CEL-HYB) originating from a crossover between CEL and its neighbouring pseudogene CELP. We compared the group of patients to 2362 healthy controls. Furthermore we examined 352 patients with alcoholic CP. For screening we used melting curve analysis, all positive samples were then verified by DNA sequencing. CEL-HYB was significantly overrepresented among patients with idiopathic or hereditary CP as well as among patients with alcoholic CP. All positive individuals were heterozygous carriers of the allele. To examine whether other rare variants within exons 1-10 outside the context of CEL-HYB could be associated with CP, 364 patients and 238 controls were sequenced. No variants were found, that were overrepresented among CP cases. For PLA2G1B we sequenced all coding exons and the flanking intronic regions in 151 cases with non-alcoholic CP and in 186 healthy control subjects. We found two variants in exon 3 that did not result in a change of the amino acid sequence: c.222T>C (p.Y74=) and c.294G>A (p.S98=). There was no significant enrichment in cases with CP compared to the controls (c.222TC: CP 0,9 % vs. controls 1,0 %; c.294GA: CP 3,0 % vs. controls 2,8 %; c.294AA: CP 0,2 % vs. controls 0,1 %). Therefor genetic alterations in PLA2G1B do not seem to play a role in the development of CP. For PNLIP we sequenced all 13 coding exons and the flanking intronic regions in 429 patients with idiopathic or hereditary CP and 600 healthy control subjects. We found heterozygous missense variants in 8/429 (1.9%) cases and in 2/600 (0.3%) controls. The most frequently found variant was p.F300L, which was present in four cases but not in controls. Both the variant p.F300L and all other variants were significantly overrepresented among CP cases. This is the first time that lipase genes were directly associated with CP. In contrast to the genes of the protease/antiprotease system identified so far the disease mechanism here does not involve premature activation of pancreatic digestive enzymes. Instead, intracellular accumulation of defective proteins might lead to injury inside the cell and induce compensatory autophagy. The identification of the two lipase genes here is therefor in many ways an exceptional and novel finding in pancreatic research.     «

Chronic pancreatitis (CP) is a continuing or relapsing inflammatory disease of the pancreas leading to irreversible morphological changes of the gland. Until now various gene mutations have been identified that are associated with CP. Since most of these mutations affect enzymes of the protease-antiprotease system, here we analysed three genes encoding pancreatic lipases: Carboxyl ester lipase (CEL), pancreatic phospholipase A2 (PLA2G1B) and pancreatic lipase (PNLIP) For CEL we screened 510 p...     »