Voltage sensitive dyes, the probes used to study the electrophysiology of neurons, were genetically targeted to cells via the chemical modification of their aliphatic tails to introduce an N-phosphonooxymethyl quaternary amine salt. This yielded soluble, non-binding prodyes that were substrates for membrane-anchored PLAP, to produce an amphiphilic dye that binds to the cell membrane. The prodye di-1,8P6-ANEPPS showed excellent selective staining, with the activated dye showing good voltage sensitivity. To use the prodyes in neural networks, Cre recombinase was fused to Tetanus neurotoxin, to undergo trans-synaptic retrograde transport and be delivered into the cytosol. The system is designed to activate a ‘gene switch’ to induce the expression of PLAP, and hence label functional neural circuits with voltage sensitive dye. The fusion protein was tested to for recombinase activity, and is now ready for testing in brain tissue.     «

Voltage sensitive dyes, the probes used to study the electrophysiology of neurons, were genetically targeted to cells via the chemical modification of their aliphatic tails to introduce an N-phosphonooxymethyl quaternary amine salt. This yielded soluble, non-binding prodyes that were substrates for membrane-anchored PLAP, to produce an amphiphilic dye that binds to the cell membrane. The prodye di-1,8P6-ANEPPS showed excellent selective staining, with the activated dye showing good voltage...     »

Spannungsabhängige Farbstoffe wurden durch Einbringen eines N-phosphonooxymethyl quaternären Aminsalzes modifiziert, um sie mittels gentechnischer Methoden gezielt an Zellen zu binden. Dies ergab lösliche, nicht bindende Vorläuferfarbstoffe, die als Substrat für membrangebundenes PLAP dienten, so dass amphiphile, membranbindende Farbstoffe entstehen. Der Vorläuferfarbstoff di-1,8P6-ANEPPS zeigte exzellente selektive Färbung, wobei der aktivierte Farbstoff gute Spannungsabhängigkeit besass. Um die Vorläuferfarbstoffe in neuronalen Netzwerken zu verwenden, wurde Cre-Rekombinase mit Tetanustoxin fusioniert, um retrograd synaptisch transportierbar zu sein. Cre aktiviert genetisch die Expression von PLAP. Dadurch werden funktionale neuronale Schaltkreise mit spannungsabhängigen Farbstoffen markiert. Die Aktivität der Rekombinase wurde nachgewiesen und das Fusionprotein kann nun im Hirngewebe getestet werden.     «

Spannungsabhängige Farbstoffe wurden durch Einbringen eines N-phosphonooxymethyl quaternären Aminsalzes modifiziert, um sie mittels gentechnischer Methoden gezielt an Zellen zu binden. Dies ergab lösliche, nicht bindende Vorläuferfarbstoffe, die als Substrat für membrangebundenes PLAP dienten, so dass amphiphile, membranbindende Farbstoffe entstehen. Der Vorläuferfarbstoff di-1,8P6-ANEPPS zeigte exzellente selektive Färbung, wobei der aktivierte Farbstoff gute Spannungsabhängigkeit besass. Um d...     »