Transfer RNAs (tRNAs) are important adapter molecules that supply amino acids to the growing polypeptide chain during translation. Their abundance is tightly regulated to ensure efficient protein synthesis in diverse cellular contexts. Global measurements of tRNA abundance are hindered by technical hurdles that we overcome with modification-induced misincorporation tRNA sequencing (mim-tRNAseq). In this work we describe the development of the method, and detail its use with an in-depth protocol.
Übersetzte Kurzfassung:
Transfer-RNAs (tRNAs) sind Adaptermoleküle, die der Polypeptidkette während der Translation Aminosäuren bereitstellen. Ihre Häufigkeit wird reguliert, um Proteinsynthese in diverse zellulären Kontexten zu gewährleisten. tRNA-Häufigkeitsmessung werden durch technische Hürden verhindert, die wir mit der „modification-induced misincorporation tRNA sequencing“ (mim-tRNAseq) überwinden. In dieser Arbeit beschreiben wir die Entwicklung der Methode und erläutern ihre Anwendung anhand eines Protokolls.