In dieser Arbeit wurde unter Verwendung von Modellplasmiden, die für das Protein Ovalbumin bzw. das Peptid SIINFEKL kodieren, untersucht, ob Plasmid-DNA zur Immunstimulation verschiedener muriner Zellpopulationen (CTL, B-Zellen, dendritische Zellen) in der Lage ist und inwiefern diese einer TLR9-Abhängigkeit unterliegt. Es konnte mittels in vitro Experimenten gezeigt werden, dass pDNA B-Zellen, dendritische Zellen und murine Makrophagen zu Zytokinproduktion und vermehrter Oberflächenexpression kostimulatorischer Moleküle induzieren kann. Die Proliferation von B-Zellen ist hingegen nicht durch Plasmid-DNA induzierbar. Plasmid-DNA ist weiterhin an der DC-Aktivierung beteiligt. Es konnte nachgewiesen werden, dass sowohl die Zytokinsynthese, als auch die Expression kostimulatorischer Oberflächenmarker durch pDNA induziert wird. Unter Verwendung von dendritischen Zellen aus TLR9-/- Mäusen konnte darüberhinaus gezeigt werden, dass die Induktion von Zytokinproduktion, wie auch die Oberflächenexpression kostimulatorischer Moleküle TLR9-vermittelt ist. Bei der in vivo-Vakzinierung von Mäusen war die Induktion peptidspezifischer zytotoxischer Lyse überraschenderweise nicht TLR9-vermittelt, da keine Unterschiede zwischen den wt- und ko-Milzzellen festzustellen waren. Eine Umgehung des TLR-9 Signalwegs via anderer TLRs konnte durch MyD88-/- Milzzellen ausgeschlossen werden. Diese Ergebnisse widersprechen den bisherigen Annahmen, dass CpG-DNA/TLR9-Wechselwirkungen eine wichtige Rolle bei Langzeit-Immunisierungsprotokollen spielen.     «

In dieser Arbeit wurde unter Verwendung von Modellplasmiden, die für das Protein Ovalbumin bzw. das Peptid SIINFEKL kodieren, untersucht, ob Plasmid-DNA zur Immunstimulation verschiedener muriner Zellpopulationen (CTL, B-Zellen, dendritische Zellen) in der Lage ist und inwiefern diese einer TLR9-Abhängigkeit unterliegt. Es konnte mittels in vitro Experimenten gezeigt werden, dass pDNA B-Zellen, dendritische Zellen und murine Makrophagen zu Zytokinproduktion und vermehrter Oberflächenexpression k...     »

We analyzed whether the immunobiology of vaccinating plasmid DNA containing a transcription unit for OVA (SIINFEKL) is influenced by immunostimulatory CpG motifs in the plasmid backbone and functions via Toll-like receptor 9 (TLR9). Indeed, plasmid DNA activated in vitro b-cells, macrophages and dendritic cells (DCs) provided they expressed the CpG-DNA receptor TLR9. Activation resulted in cytokine production and up-regulated expression of costimulatory molecules CD40 and CD86. In vivo, however, even upon repeated vaccination with plasmid DNA, priming of OVA-specific CTL and clonal expansion of SIINFEKL-specific CD8 T cells were equal in TLR9-positive and TLR9- or MyD88-negative mice. Overall, these results negate a dominant role of CpG-DNA/TLR9 interactions in long-term vaccination protocols.     «

We analyzed whether the immunobiology of vaccinating plasmid DNA containing a transcription unit for OVA (SIINFEKL) is influenced by immunostimulatory CpG motifs in the plasmid backbone and functions via Toll-like receptor 9 (TLR9). Indeed, plasmid DNA activated in vitro b-cells, macrophages and dendritic cells (DCs) provided they expressed the CpG-DNA receptor TLR9. Activation resulted in cytokine production and up-regulated expression of costimulatory molecules CD40 and CD86. In vivo, however,...     »