Here, we report the establishment of a high throughput-screening platform used for the engineering of FLS for in vivo implementation in synthetic methylotrophy. A novel FLS variant was identified exhibiting higher expression levels, improved thermal stability, a lower KM and enabling better formaldehyde tolerance in E. coli. Finally, implementation of synthetic methylotrophy in Y. lipolytica was tested using FLS or RuMP pathway modules in a randomized synthetic biology approach.
Übersetzte Kurzfassung:
In dieser Arbeit wurde ein Hochdurchsatz-Screening für die Verbesserung des FLS Enzyms zur Anwendung in der synthetischen Methylotrophie etabliert. Es wurde eine Variante identifiziert, die eine höhere Expression, eine verbesserte thermische Stabilität und einen niedrigeren KM-Wert aufweist und eine bessere Formaldehydtoleranz in E. coli ermöglicht. Zudem wurde die Etablierung der synthetischen Methylotrophie in Y. lipolytica unter Verwendung von FLS- oder RuMP-Stoffwechselmodulen getestet.