Zum Zweck der biochemischen und strukturbiologische Analyse wurden zehn humane Vertreter der Lipocalinfamilie durch Sekretion in das Periplasma von E. coli produziert. Für vier unterschiedliche Liganden (Retinol, Retinsäure, DAUDA und ANS) wurden Dissoziationskonstanten unter identischen Meßbedingungen bestimmt. Unter Nutzung des Expressionssystems wurde die Röntgenkristallstruktur des rekombinanten a1-Acid-Glycoproteins (AGP) aufgeklärt und dessen Zugehörigkeit zur Lipocalinfamilie bestätigt. Die überwiegend unpolare Bindungstasche des AGP läßt sich in drei unterschiedliche Taschen unterteilen, was die breite Ligandenbindungsaktivität dieses Lipocalins erklärt. Weiterhin wurde die Kristallstruktur eines Proteinkomplexes zwischen einem Lipocalin mit künstlicher Bindespezifität (Anticalin) und seinem Protein-Zielmolekül, dem humanen Immunrezeptor CTLA4, aufgeklärt. Der Vergleich mit der ebenfalls analysierten Apoform dieses Anticalins illustriert die erstaunliche Flexibilität der Binderegion, ähnlich dem Bindungsmechanismus von Antikörpern.     «

Zum Zweck der biochemischen und strukturbiologische Analyse wurden zehn humane Vertreter der Lipocalinfamilie durch Sekretion in das Periplasma von E. coli produziert. Für vier unterschiedliche Liganden (Retinol, Retinsäure, DAUDA und ANS) wurden Dissoziationskonstanten unter identischen Meßbedingungen bestimmt. Unter Nutzung des Expressionssystems wurde die Röntgenkristallstruktur des rekombinanten a1-Acid-Glycoproteins (AGP) aufgeklärt und dessen Zugehörigkeit zur Lipocalinfamilie bestätigt. D...     »

To perform biochemical and structural analyses, ten human members of the lipocalin protein family were produced by secretion into the periplasm of E. coli. Dissociation constants were determined for four different ligands (retinol, retinoic acid, DAUDA and ANS) under identical conditions. Using the same expression system, the X-ray crystal structure of a1-acid-glycoprotein (AGP) was elucidated, thus confirming its membership of the lipocalin family. The predominantly nonpolar binding pocket of AGP can be divided into three smaller pockets, which explains the broad ligand-binding activity of this lipocalin. Furthermore, the crystal structure of a protein complex of an engineered lipocalin (anticalin) and its protein target, the human immune receptor CTLA4, was solved. Comparison with the uncomplexed anticalin (apoprotein), which was also analyzed, illustrates the astonishing flexibility of the binding site, comparable to the recognition mode of antibodies.     «

To perform biochemical and structural analyses, ten human members of the lipocalin protein family were produced by secretion into the periplasm of E. coli. Dissociation constants were determined for four different ligands (retinol, retinoic acid, DAUDA and ANS) under identical conditions. Using the same expression system, the X-ray crystal structure of a1-acid-glycoprotein (AGP) was elucidated, thus confirming its membership of the lipocalin family. The predominantly nonpolar binding pocket of A...     »