Calpaine sind Cysteinproteasen, deren Aktivität Ca²⁺-abhängig ist. Die µ- und m-Isoformen, werden in vitro durch mikro- bzw. millimolare Ca²⁺-Konzentrationen aktiviert. Eine negativ geladene Schleife in der Domäne III wurde anhand der Kristallstruktur des m-Calpain als Ca²⁺-empfindlicher Schalter vorgeschlagen, der durch elektrostatische Wechselwirkungen mit der katalytischen Domäne sowie mit der Zellmembran die Aktivierung regulieren könnte. Um die Rolle dieses Strukturmotivs zu untersuchen, wurden mehrere Mutanten des µ-Calpains gentechnisch hergestellt, in denen saure Aminosäuren der Schleife durch Alanin ersetzt waren. Ihr Ca²⁺-abhängiges Aktivierungs- und Membranbindungsverhalten wurde anhand der Enzymkinetik sowie mittels Fluoreszenz- und SPR-Spektroskopie bestimmt. Parallel dazu wurde untersucht, wie die Autoproteolyse der Domäne V diese beiden Phänomene beeinflusst. Darauf basierend wird ein Modell für die Aktivierung und Membranbindung der Calpaine vorgeschlagen.