Functional and Comparative Analysis of Small Molecule Glycosyltransferases from Plants by High-Throughput Assays

McGraphery, Kate

Kate McGraphery

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Original title:: Functional and Comparative Analysis of Small Molecule Glycosyltransferases from Plants by High-Throughput Assays
Translated title:: Funktionelle und vergleichende Analyse von Glykosyltransferasen kleiner Moleküle aus Pflanzen durch Hochdurchsatz-Assays
Author:: McGraphery, Kate
Year:: 2021
Document type:: Dissertation
Faculty/School:: TUM School of Life Sciences
Advisor:: Schwab, Wilfried (Prof. Dr.)
Referee:: Schwab, Wilfried (Prof. Dr.); Dawid, Corinna (Prof. Dr.)
Language:: en
Subject group:: NAT Naturwissenschaften (allgemein)
Keywords:: family-1 plant GTs, HTP activity assays, allosteric regulation
Translated keywords:: pflanzliches GTs der Familie 1, Hochdurchsatz-(HTP-) Quantifizierungsmethoden, allosterische Aktivatoren oder Inhibitoren
TUM classification:: CHE 870
Abstract:: New commercially available HTP methods are compared and tailored to suit family-1 plant GTs. A pH-Sensitive assay, UDP-GloTM GT assay, Phosphate GT assay, and UDP2 TR-FRET assay were studied. Substrate screening and kinetic parameters (KM, Vmax, and kcat) were quantified. The tailored UDP-GloTM GT assay was utilized in enhancement and inhibition of UDP-glucose hydrolase and glycosylation reactions of family-1 plant GTs. It was successfully determined that (apo)carotenoids are able to enhance and drive glucoside formation. Therefore, this demonstrates the novel physiological function of (apo)carotenoids and their ability to act as allosteric activators of family-1 plant GTs. «
New commercially available HTP methods are compared and tailored to suit family-1 plant GTs. A pH-Sensitive assay, UDP-GloTM GT assay, Phosphate GT assay, and UDP2 TR-FRET assay were studied. Substrate screening and kinetic parameters (KM, Vmax, and kcat) were quantified. The tailored UDP-GloTM GT assay was utilized in enhancement and inhibition of UDP-glucose hydrolase and glycosylation reactions of family-1 plant GTs. It was successfully determined that (apo)carotenoids are able to enhance and... »
Translated abstract:: Neue kommerziell verfügbare HTP-Methoden verglichen und auf pflanzliches GTs der Familie 1 zugeschnitten. Ein pH-sensitiver Assay, ein UDP-GloTM-GT-Assay, ein Phosphat-GT-Aktivitäts-Assay und ein UDP2 TR-FRET-Assay wurden untersucht. Substratscreening und kinetische Parameter (KM, Vmax und kcat) wurden quantifiziert. Der angepasste UDP-GloTM GT-Assay wurde zur Verbesserung und Hemmung der UDP-Glucose-Hydrolase und der Glykosylierungsreaktionen von pflanzlichen GTs der Familie 1 eingesetzt. Dies zeigt erstmals die Fähigkeit von (Apo)Carotinoiden als allosterische Aktivatoren pflanzlicher GTs der Familie 1 zu wirken. «
Neue kommerziell verfügbare HTP-Methoden verglichen und auf pflanzliches GTs der Familie 1 zugeschnitten. Ein pH-sensitiver Assay, ein UDP-GloTM-GT-Assay, ein Phosphat-GT-Aktivitäts-Assay und ein UDP2 TR-FRET-Assay wurden untersucht. Substratscreening und kinetische Parameter (KM, Vmax und kcat) wurden quantifiziert. Der angepasste UDP-GloTM GT-Assay wurde zur Verbesserung und Hemmung der UDP-Glucose-Hydrolase und der Glykosylierungsreaktionen von pflanzlichen GTs der Familie 1 eingesetzt. Dies... »
WWW:: https://mediatum.ub.tum.de/?id=1595115
Date of submission:: 03.02.2021
Oral examination:: 11.06.2021
File size:: 3682197 bytes
Pages:: 151
Urn (citeable URL):: https://nbn-resolving.de/urn/resolver.pl?urn:nbn:de:bvb:91-diss-20210611-1595115-1-3
Last change:: 01.09.2021
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