Cryo-electron tomography (CET) combined with 3D image classification and averaging becomes an increasingly powerful method aiming at the analysis of the structure and interactions of macromolecular complexes in their natural context. By means of the porin MspA from Mycobacterium smegmatis this thesis evaluates to what extent cryopreparation, adapted data acquisition and further developed data analysis and reconstruction can be applied to the in situ analysis of medium sized membrane proteins. The porin could be resolved at ̴ 2 nm and the transmembrane region was clearly distinguishable from the lipid bilayer. The study presents a methodical extension of CET that can be adapted to the analysis of membrane proteins in general. Furthermore, besides the structural investigations, functional properties of MspA are assessed with electrophysiological methods.     «

Cryo-electron tomography (CET) combined with 3D image classification and averaging becomes an increasingly powerful method aiming at the analysis of the structure and interactions of macromolecular complexes in their natural context. By means of the porin MspA from Mycobacterium smegmatis this thesis evaluates to what extent cryopreparation, adapted data acquisition and further developed data analysis and reconstruction can be applied to the in situ analysis of medium sized membrane proteins. Th...     »

Kryo-Elektronentomographie (CET) in Kombination mit 3D Klassifizierung und Mittelung ist eine leistungsfähige Methode zur Analyse der Struktur und Interaktion von makromolekularen Komplexen in ihrer natürlichen Umgebung. Am Beispiel des Porins MspA aus Mycobacterium smegmatis wird gezeigt, mit welchem Ergebnis Kryopräparation, adaptierte Datenakquisition sowie die fortentwickelte Analyse und Rekonstruktion der Daten für die in situ Untersuchung von Membranproteinen mittlerer Größe angewendet werden kann. Es gelang das Porin bis zu ̴ 2 nm aufzulösen und den membrandurchspannenden Teil vom Lipidbilayer abzugrenzen. Die Arbeit stellt eine methodische Erweiterung der CET dar, welche generell für eine Analyse von Membranproteinen eingesetzt werden kann. Neben den strukturellen Aspekten werden außerdem funktionelle Eigenschaften von MspA mit elektrophysiologischen Methoden untersucht.      «

Kryo-Elektronentomographie (CET) in Kombination mit 3D Klassifizierung und Mittelung ist eine leistungsfähige Methode zur Analyse der Struktur und Interaktion von makromolekularen Komplexen in ihrer natürlichen Umgebung. Am Beispiel des Porins MspA aus Mycobacterium smegmatis wird gezeigt, mit welchem Ergebnis Kryopräparation, adaptierte Datenakquisition sowie die fortentwickelte Analyse und Rekonstruktion der Daten für die in situ Untersuchung von Membranproteinen mittlerer Größe angewendet wer...     »