This study describes the development and application of methods for the identification and quantitative comparison of protein complexes. First, a novel tandem affinity purification method (SF-TAP) was optimized and applied for the analysis of protein networks within the MAPK pathway. Next, it was used for the identification of the protein complex of lebercilin, a protein associated with the severe blinding disease Leber congenital amaurosis (LCA). Lebercilin was shown to interact with cytoskeleton associated proteins. Finally, a quantitative, mass spectrometry-based method, was established to compare the protein complex of lebercilin to a LCA-causing mutants. The comparison revealed the association of lebercilin with the intraflagellar transport machinery (IFT) and loss of this association with the mutant variant. This is the first hint towards impairment of IFT function, essential for photoreceptor survival and thereby vision, in LCA.     «

This study describes the development and application of methods for the identification and quantitative comparison of protein complexes. First, a novel tandem affinity purification method (SF-TAP) was optimized and applied for the analysis of protein networks within the MAPK pathway. Next, it was used for the identification of the protein complex of lebercilin, a protein associated with the severe blinding disease Leber congenital amaurosis (LCA). Lebercilin was shown to interact with cytoskelet...     »

Diese Arbeit beschreibt die Entwicklung von Methoden zur Analyse von Proteinkomplexen. Eine neue Tandem Affinitätsreinigung (SF-TAP), wurde für die Analyse von Proteinnetzwerken im MAPK Signalweg optimiert und angewendet. Anschließend wurden Interaktionspartner des Proteins Lebercilin, einem Protein dass mit einer schweren erblichen Blindheit, der Lebersche kongenitale Amaurose (LCA), assoziiert wurde, mittels SF-TAP identifiziert. Dadurch wurde gezeigt, dass Lebercilin mit Zytoskelettproteinen interagiert. Eine quantitative, Massenspektrometrie basierte Methode, wurde für den Vergleich des Lebercilin Komplexes mit dem einer LCA verursachenden Variante entwickelt. Lebercilin interagiert mit Proteinen des intraflagellaren Transports (IFT), der essentiell für die Aufrechterhaltung der Photorezeptoren ist. Diese Interaktion geht durch die Mutation verloren. Damit ergab sich der erste Hinweis auf die Beeinträchtigung des IFT bei LCA.     «

Diese Arbeit beschreibt die Entwicklung von Methoden zur Analyse von Proteinkomplexen. Eine neue Tandem Affinitätsreinigung (SF-TAP), wurde für die Analyse von Proteinnetzwerken im MAPK Signalweg optimiert und angewendet. Anschließend wurden Interaktionspartner des Proteins Lebercilin, einem Protein dass mit einer schweren erblichen Blindheit, der Lebersche kongenitale Amaurose (LCA), assoziiert wurde, mittels SF-TAP identifiziert. Dadurch wurde gezeigt, dass Lebercilin mit Zytoskelettproteinen...     »