Zum Nachweis von Salmonella spp. aus Fleisch wurde eine IMS-real-time PCR-Methode etabliert und anhand des kulturellen Referenzverfahrens nach §35 LMBG durch artefiziell sowie nativ kontaminierte Fleischproben validiert. Die Verfahrensschritte der Schnellmethode schließen eine sechsstündige nicht selektive Voranreicherung, eine immunomagnetische Separation, Lysispuffer-Proteinase-K DNA-Extraktion sowie DNA-Säulenaufreinigung mit anschließender real-time PCR (Detektions-format: Hybridisierungssonden) ein. Die Nachweisgrenze für beide Methoden lag bei 10 KBE/25 g. Für die Schnellmethode ergab sich im Hinblick auf artefiziell kontaminierte Fleischproben (n = 36) eine Spezifität von 80 % (Falsch-Positiv-Rate: 20 %) sowie eine Sensitivität von 100 % (Falsch-Negativ-Rate: 0 %). Die relative Richtigkeit lag bei 94 %. Die durch den Konkordanzindex κ definierte statistische Übereinstimmung lag bei 0,85, so dass eine Übereinstimmung beider Methoden nach statistischen Kriterien gegeben ist. Für natürlich kontaminierte Fleischproben (n = 491) ergab sich für die Schnellmethode im Vergleich zur Referenzmethode eine Spezifität von 99,3 % (Falsch-Positive Rate: 0,7 %) und eine Sensitivität von 84 % (Falsch-Negativ-Rate: 16 %). Die relative Richtigkeit lag bei 98 %. Der Konkordanzindex κ zeigte mit einem Wert von 0,87 die Übereinstimmung beider Methoden nach statistischen Kriterien an. Im Vergleich zum kulturellen Verfahren, das ein Ergebnis nach 5-7 tagen liefert, errecht dies die Schnellmethode bereits nach 12-13 h. Da die IMS-real-time PCR-Methode jedoch kein lebendes Isolat zur epidemiologischen Typisierung liefert, wird die parallele Anwendung des kulturellen Verfahrens empfohlen     «

Zum Nachweis von Salmonella spp. aus Fleisch wurde eine IMS-real-time PCR-Methode etabliert und anhand des kulturellen Referenzverfahrens nach §35 LMBG durch artefiziell sowie nativ kontaminierte Fleischproben validiert. Die Verfahrensschritte der Schnellmethode schließen eine sechsstündige nicht selektive Voranreicherung, eine immunomagnetische Separation, Lysispuffer-Proteinase-K DNA-Extraktion sowie DNA-Säulenaufreinigung mit anschließender real-time PCR (Detektions-format: Hybridisierungsson...     »

For the detection of Salmonella spp. in meat an IMS-real-time PCR-method was established and validated with the method L 00.00-20 of the Official Collection of Methods of Analysis according to §35 of the German Law on Food and Commodities. The validation was carried out with artificially and naturally contaminated meat samples.The rapid method includes a non-selective preenrichment step for 6 hours, an immunomagnetic separation, lysis-buffer proteinase K DNA extraction as well as DNA purification followed by real-time PCR analysis (detection format: hybridisation probes). The detection limit of both methods was 10 cfu/25 g. Compared with the reference method and regarding aritificially contaminated meat samples (n = 36) the IMS-real-time PCR-method achieved a specificity of 80 % (false-positive-rate: 20 %) and a sensitivity of 100 % (false-negative-rate: 0 %). The relative accuracy was 94 %. The concordance index κ showed 0,85 what indicates that the IMS-real-time PCR-method and the cultural reference method agree on statistical criteria. Regarding naturally contaminated meat samples (n = 491) the real-time PCR showed a specificity of 99,3 % (false-positive-rate: 0,7 %) and a sensitivity of 84 % (false-negative-rate: 16,3 %). The relative accuracy was 98 %. The concordance index κ indicated with a value of 0,87 that both methods statistically agree. The cultural reference method provides a result after 5-7 days unlike the IMS-real-time PCR method, which gains a result after 12-13 h. The rapid method does not provide a viable isolate for epidemiological typing. Therefore the parallel application of the cultural reference method is recommended.     «

For the detection of Salmonella spp. in meat an IMS-real-time PCR-method was established and validated with the method L 00.00-20 of the Official Collection of Methods of Analysis according to §35 of the German Law on Food and Commodities. The validation was carried out with artificially and naturally contaminated meat samples.The rapid method includes a non-selective preenrichment step for 6 hours, an immunomagnetic separation, lysis-buffer proteinase K DNA extraction as well as DNA purificatio...     »