Das 20S Proteasom ist eine ca. 700 kDa schwere zylinderförmige, multikatalytische Protease, die von einem zentralen Kanal durchzogen ist. Dieser weitet sich zu drei internen Kammern auf, zwei Vorkammern und einer zentralen Kammer, in der sich die aktiven Zentren befinden. Zur Untersuchung des Mechanismus der Substrattranslokation in das 20S Proteasom wurden "Host-Guest" Komplexe des inhibierten 20S Proteasoms aus Thermoplasma acidophilum mit Cytochrom c und GFP hergestellt. Die jeweiligen Substrate wurden im Inneren der Kammern des 20S Proteasoms rückgefaltet und somit am Austritt durch den Kanal gehindert. Diese Komplexe wurden anschließend mittels verschiedener biochemischer und biophysikalischer Methoden, wie Elektronenmikroskopie, Elektrospray-Ionisations Massenspektrometrie, Röntgenkleinwinkelstreuung und Röntgenkristallographie, untersucht. Aufgrund der erlangten Daten konnte eine Hypothese über den Mechanismus der Substrattranslokation und die daran maßgeblich beteiligten Aminosäurereste aufgestellt werden.     «

Das 20S Proteasom ist eine ca. 700 kDa schwere zylinderförmige, multikatalytische Protease, die von einem zentralen Kanal durchzogen ist. Dieser weitet sich zu drei internen Kammern auf, zwei Vorkammern und einer zentralen Kammer, in der sich die aktiven Zentren befinden. Zur Untersuchung des Mechanismus der Substrattranslokation in das 20S Proteasom wurden "Host-Guest" Komplexe des inhibierten 20S Proteasoms aus Thermoplasma acidophilum mit Cytochrom c und GFP hergestellt. Die jeweiligen Substr...     »

The 20S proteasome is a 700 kDa cylinder shaped proteolytic complex. It is traversed by a central channel, which widens into three cavities, two antechambers and one central chamber which harbours the active sites. In order to elucidate the mechanism of substrate translocation into the 20S proteasome, "host-guest" complexes of the inhibited 20S proteasomes from thermoplasma acidophilum with cytochrome c and gfp were formed. The respective substrates were refolded inside the internal cavities of the 20S proteasomes and thus trapped, since they are incapable of leaving through the channel. The complexes were then analyzed using a variety of biochemical and biophysical techniques such as electron microscopy, electrospray ionization mass spectrometry, small angle x-ray scattering and x-ray crystallography. On the basis of the results obtained a hypothesis about the mechanism of substrate translocation and the amino acids playing a decisive role in this process could be formulated.     «

The 20S proteasome is a 700 kDa cylinder shaped proteolytic complex. It is traversed by a central channel, which widens into three cavities, two antechambers and one central chamber which harbours the active sites. In order to elucidate the mechanism of substrate translocation into the 20S proteasome, "host-guest" complexes of the inhibited 20S proteasomes from thermoplasma acidophilum with cytochrome c and gfp were formed. The respective substrates were refolded inside the internal cavities of...     »