Overexpression of hetereologous proteins in E. coli often leads to the formation of large insoluble aggregates, the so called inclusion bodies (IBs). In this work, IMAC (immobilized metal affinity chromatography) was applied to identify optimal buffer conditions for the refolding of his-tagged IBs protein. To minimize the number of buffer conditions in the screening procedure a stepwise approach was introduced. The optimization of the refolding buffer was successful for six test proteins Furthermore matrix-assisted refolding could be efficiently carried out at 1000 fold higher protein concentrations was faster, compared to refolding in solution. Special attention was paid to the analysis of the re-association of a large tetrameric protein ß-galactosidase in the matrix-assisted refolding process.     «

Overexpression of hetereologous proteins in E. coli often leads to the formation of large insoluble aggregates, the so called inclusion bodies (IBs). In this work, IMAC (immobilized metal affinity chromatography) was applied to identify optimal buffer conditions for the refolding of his-tagged IBs protein. To minimize the number of buffer conditions in the screening procedure a stepwise approach was introduced. The optimization of the refolding buffer was successful for six test proteins Further...     »

Eine Überexpression von Fremdproteinen in E. coli führt häufig zur Bildung von großen, unlöslichen Aggregaten, den sogenannten Einschlusskörperchen oder inclusion bodies (IBs). In dieser Arbeit wurde Ni-Affinitätschromatographie eingesetzt, um die optimalen Pufferbedingungen für die Rückfaltung His-getagter inclusion body–Proteine zu ermitteln. Um die Anzahl der Pufferbedingungen im Screeningverfahren zu minimieren, wurde die Optimierung schrittweise ausgeführt. In dieser Arbeit konnte der Rückfaltungspuffer für sechs getestete Proteine erfolgreich optimiert werden. Außerdem es stellte sich heraus, dass für alle getesteten Proteine die Rückfaltung auf der Matrix schneller als in Lösung und bei einer tausendfach höheren Proteinkonzentration möglich war. Außerdem wurde der Mechanismus der Assemblierung und Oligomerisierung der ß-Galaktosidase auf der Matrix näher untersucht.      «

Eine Überexpression von Fremdproteinen in E. coli führt häufig zur Bildung von großen, unlöslichen Aggregaten, den sogenannten Einschlusskörperchen oder inclusion bodies (IBs). In dieser Arbeit wurde Ni-Affinitätschromatographie eingesetzt, um die optimalen Pufferbedingungen für die Rückfaltung His-getagter inclusion body–Proteine zu ermitteln. Um die Anzahl der Pufferbedingungen im Screeningverfahren zu minimieren, wurde die Optimierung schrittweise ausgeführt. In dieser Arbeit konnte der Rückf...     »