Phage Display, Fab Fragment, pASK111Rab-p3, pASK85Rab-p3
Kurzfassung:
Für den Einsatz in der Umweltanalytik wurde ein E.coli Phage Display-System entworfen und entwickelt. Das neue System sollte wahlweise für murine und leporide Antikörpergene anwendbar sein, bewährte Eigenschaften bisheriger Phagemide berücksichtigen und die Durchführbarkeit verschiedener Display- Formate ermöglichen. Es wurden drei Phagemid- Vektoren konstruiert und ihre Funktionalität verglichen. Unter Beachtung der speziellen Anforderungen in der Umweltanalytik wurden vierzig Primer zur Amplifikation von Immunglobulinen aus Kaninchen entworfen und erfolgreich eingesetzt. Die daraus gewonnen Daten ließen sich zur Entwicklung einer für leporide Antikörpergene geeigneten Cloning Site einsetzen. Das auf diese Weise erhaltene Phagemid pASK111Rab-p3 wurde zur Generierung einer Sulfonamid-spezifischen Fab-Fragment-Bibliothek aus Kaninchen eingesetzt. Abschließend konnten hieraus erfolgreich zwei affine Fab-Fragmente selektiert werden.
Übersetzte Kurzfassung:
An improved E.coli Phage Display System was designed and developed for application in environmental analytics. The purpose of the new system was the dual adaptability for murine and leporide Immunoglobulin genes. The features of established phagemide systems and and the possibility to choose between different display formats were taken into account. Therefore three new phagemids were constructed and functional tests were applied. For applications in environmental analysis forty primers were designed for the selection of rabbit derived Fab-Fragments and successfully applied in PCR amplification. All generated data were used to design a new cloning site usable for rabbit antibody genes. After insertion of this cloning site resulting in the phagmide pASK111Rab-p3, this vector was used to clone a sulfonamide specific Fab-Fragment library. Finally two Fab-Fragments were successfully selected.
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